[發(fā)明專利]用于糖蛋白檢測(cè)的硼酸鹽及制備該硼酸鹽的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810075773.4
• 申請(qǐng)日: 2018-01-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108299483A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘇宏文;賴華;梁偉業(yè);劉志文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東優(yōu)尼德生物科技有限公司;賽馳生物科技（上海）有限公司
• 主分類號(hào): C07F5/02
• 分類號(hào): C07F5/02;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 上海點(diǎn)威知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31326
• 代理人: 許曉琳

1.用于糖蛋白檢測(cè)的硼酸鹽，其特征在于，具體為6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基異硫氰酸熒光素苯硼酸鹽，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

2.權(quán)利要求1所述用于糖蛋白檢測(cè)的硼酸鹽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將2-氯-4-甲氧基-1,3-苯二酚和4-硝基苯二甲酸酐反應(yīng)制得4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-異硫氰基-熒光素，然后將所述4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-異硫氰基-熒光素與間氨基苯硼酸反應(yīng)制得6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基異硫氰酸熒光素苯硼酸鹽。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述2-氯-4-甲氧基-1,3-苯二酚通過(guò)2-氯代香蘭素和雙氧水反應(yīng)制得。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述2-氯-4-甲氧基-1,3-苯二酚的制備方法，包括如下步驟：將2-氯代香蘭素溶于二氯甲烷中,冷卻到-5℃～0℃，加入二氧化硒和雙氧水，在15℃～20℃下充分反應(yīng)，然后將反應(yīng)液倒入亞硫酸氫鈉水溶液中，分液并干燥，將有機(jī)相濃縮至干并溶于鹽酸甲醇溶液中，再濃縮至干，經(jīng)重結(jié)晶后得到所述2-氯-4-甲氧基-1,3苯二酚。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，2-氯代香蘭素和雙氧水的摩爾比為1：3，二氧化硒的用量是2-氯代香蘭素摩爾用量的8％。

6.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-異硫氰基-熒光素的制備方法，包括如下步驟：

步驟一，將2-氯-4-甲氧基-1,3苯二酚和4-硝基苯二甲酸酐溶于甲磺酸中，然后加入無(wú)水四氯化錫并加熱到80℃-90℃，充分反應(yīng)后冷卻到室溫，將反應(yīng)液倒入到冰水中，收集析出的固體，然后用柱層析純化分離，分別得到4,5-二氯-2,7-二甲氧基-5-硝基-熒光素和4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-硝基-熒光素；

步驟二，將4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-硝基-熒光素還原為4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-氨基-熒光素；

步驟三，將4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-氨基-熒光素中的氨基轉(zhuǎn)換為異硫氰基，得到4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-異硫氰基-熒光素。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，2-氯-4-甲氧基-1,3苯二酚和4-硝基苯二甲酸酐的摩爾比為2：1；2-氯-4-甲氧基-1,3苯二酚和無(wú)水四氯化錫的摩爾比為2：1。

8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟二中，通過(guò)加入硫化鈉和硫氰化鈉，將4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-硝基-熒光素中的硝基還原為氨基；步驟三中，通過(guò)加入二硫化碳反應(yīng)得到所述4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-異硫氰基-熒光素。

9.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基異硫氰酸熒光素苯硼酸鹽的制備方法，包括如下步驟：將4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-異硫氰基-熒光素和間氨基苯硼酸溶于D,D-二甲基甲酰胺中并冷卻到-5℃～0℃,加入三乙胺充分反應(yīng)，然后將反應(yīng)液純化后得到6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基異硫氰酸熒光素苯硼酸鹽。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-異硫氰基-熒光素和間氨基苯硼酸的摩爾比為3：5；4,5-二氯-2,7-二甲氧基-6-異硫氰基-熒光素和三乙胺的摩爾比為1：2。