[發明專利]利用雙三元泵在線檢測血液中卡馬西平藥物含量的方法

在審

• 申請號: 201810075228.5
• 申請日: 2018-01-25
• 公開（公告）號: CN108037225A
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發明（設計）人: 魏斌;賈永娟;倪君君
• 申請（專利權）人: 北京和合醫學診斷技術股份有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 北京雙收知識產權代理有限公司 11241
• 代理人: 李云鵬

1.一種利用雙三元泵在線檢測血液中卡馬西平藥物含量的方法，其特征在于：它包括以下步驟：

(一)標準溶液的標定

首先將至少三種不同濃度的標準工作液10μL和90μL的由1∶1的甲醇和水組成的稀釋液分別置于1.5mL離心管中混合制成至少三種標準溶液，上述標準溶液分別在轉速為800-1200rpm下渦旋混勻1-2min后，用高效液相色譜分析儀和DAD檢測器對上述至少三種標準溶液進行檢測，得出上述至少三種標準溶液的卡馬西平色譜圖，以上述至少三個標準溶液的卡馬西平峰面積作為標準曲線圖的縱坐標y，以上述標準工作液中含有卡馬西平的濃度作為標準曲線圖的橫坐標x，將以上檢測所得至少三組數據進行線性回歸，擬合得到標準曲線方程為y＝a*x+b，并且得出權重系數a和b；所述標準工作液為含有卡馬西平的溶液；

(a)標準工作液的配制：

精確稱取卡馬西平標準品15mg置于10mL容量瓶，用甲醇進行溶解，并定容于10mL，得到標準儲備液，將標準儲備液用含水量為20％-60％的甲醇溶液的稀釋液進行稀釋，分別在含有5-400mg/L卡馬西平的范圍內配置出各標準工作液，并在-80℃條件下保存；

(二)檢測血液的離心

取待檢測血液至少5mL，在離心速度為3500rpm下離心10min，取上清液得血清或血漿，上述血清或血漿置于-20℃冷凍下保存至分析前備用；

(三)待測樣品處理

(b)用一次性無菌注射器吸取步驟(二)中的血清或血漿350μL，然后將上述無菌注射器前端連接針孔濾膜，將上述血清或血漿進行過濾后，將其移入1.5mL管中，得到待測樣品；

(四)待測樣品的檢測

使用高效液相色譜分析儀和DAD檢測器對上述步驟(b)待測樣品100μL進行檢測，得出上述待測樣品的卡馬西平色譜圖，將上述色譜圖中的卡馬西平峰面積y代入上述步驟(一)的標準曲線方程中，通過計算得到待檢測樣品中目標物濃度x，即為待檢測血液中的卡馬西平藥物濃度；

高效液相色譜分析儀包括：雙三元泵、在線過濾器、SPE柱和色譜柱；標準工作液和待測樣品分別通過雙三元泵依次進入在線過濾器、SPE柱和色譜柱。

2.如權利要求1所述的利用雙三元泵在線檢測血液中卡馬西平藥物含量的方法，其特征在于：在步驟(一)中使用七種不同濃度的標準工作液，七種不同濃度的標準工作液分別為含有5.00、10.00、20.00、40.00、80.00、160.00、320.00mg/L濃度的卡馬西平溶液。

3.如權利要求2所述的利用雙三元泵在線檢測血液中卡馬西平藥物含量的方法，其特征在于：在步驟(a)中用由1∶1的水和甲醇組成的稀釋液進行稀釋。

4.如權利要求3所述的利用雙三元泵在線檢測血液中卡馬西平藥物含量的方法，其特征在于：所述SPE柱為資生堂公司的C18MG S-3。

5.如權利要求3所述的利用雙三元泵在線檢測血液中卡馬西平藥物含量的方法，其特征在于：所述色譜柱為AgiLent公司的Extend-C18，在線過濾器為AgiLent 1290InfinityinLine fiLter。

6.如權利要求3所述的利用雙三元泵在線檢測血液中卡馬西平藥物含量的方法，其特征在于：所述高效液相色譜儀設置的柱溫為30℃。

7.如權利要求3所述的利用雙三元泵在線檢測血液中卡馬西平藥物含量的方法，其特征在于：所述高效液相色譜儀所使用流動相為甲醇-水，并且雙三元泵采用梯度洗脫，流速為1mL/min，進樣量為10uL。

8.如權利要求4至7之一所述的利用雙三元泵在線檢測血液中卡馬西平藥物含量的方法，其特征在于：所述DAD檢測器的檢測波長為318nm，采集頻率為5Hz，響應常數為1s。

9.如權利要求8所述的利用雙三元泵在線檢測血液中卡馬西平藥物含量的方法，其特征在于：所述含水量為體積比的含水量。