[發明專利]一種檢測血液中西酞普蘭含量的液相色譜分析方法

在審

• 申請號: 201810075227.0
• 申請日: 2018-01-25
• 公開（公告）號: CN108132315A
• 公開（公告）日: 2018-06-08
• 發明（設計）人: 張國成;張杰;賈永娟;倪君君
• 申請（專利權）人: 北京和合醫學診斷技術股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京雙收知識產權代理有限公司 11241
• 代理人: 李云鵬

本發明檢測血液中西酞普蘭藥物濃度的方法是使用液相色譜分析儀器和熒光檢測器對標準溶液進行標定，擬合得到標準曲線方程為y＝a*x+b，取待測血液樣品，在該待檢測血液經過處理后，同樣使用液相色譜分析儀器和熒光檢測器對待測的樣品進行檢測，得到待測血液y值，將待測血液y代入標準曲線方程中，通過計算得到待測血液樣品中目標物相對濃度x，內標物工作液濃度是已知的，由此計算得到該樣本中待檢測血液中的西酞普蘭藥物濃度，本發明將內標法與高效液相色譜法相結合，提高了定量結果的準確性，消除系統誤差；縮短了分析時間，使檢測過程簡便快速，更利于在臨床治療中對患者體內的西酞普蘭血藥濃度進行監測。

技術領域

本發明涉及精神類藥物的臨床血藥濃度監測技術領域，尤其涉及一種檢測血液中抗抑郁藥物西酞普蘭濃度的方法。

背景技術

西酞普蘭(citalopram)，分子式為C₂₀H₂₁FN₂O，具體化學結構如下圖1所示，其屬于選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑，由于對受體選擇性高，較少產生嚴重的心血管毒性，不易產生藥物相互作用，患者依從性較好，已成為抗抑郁的一線藥物，此外，臨床上亦用于鎮痛、戒酒及老年性癡呆和多發梗塞性癡呆的治療。受基因多態性影響，個體體內藥物濃度差異較大，血藥濃度與臨床療效和不良反應密切相關，在精準醫學時代，需要監測患者血藥濃度并根據血藥濃度來調整藥物劑量，以實現個體化用藥。因此，測定血液中西酞普蘭濃度對保證其藥物療效具有重要作用。

常用的西酞普蘭血藥濃度的測定方法主要包括毛細管電泳-電化學發光法、高效液相色譜-熒光檢測法、高效液相色譜-紫外檢測法、高效液相色譜質譜聯用法等。其中，高效液相色譜質譜聯用法成本較高，對人員及場地要求高，不適于在中小型醫院等廣泛開展，故目前國內外檢測人體血漿中西酞普蘭濃度的方法主要是高效液相色譜法，但西酞普蘭在人體中的血藥濃度較低，且目前方法前處理操作較復雜，外標法定量易導致結果不夠準確，此外，還存在分析時間較長，消耗有機溶劑較多等問題。

發明內容

針對上述技術問題，本發明目的是提供一種檢測血液中西酞普蘭藥物濃度的方法，將內標法與高效液相色譜法相結合，使西酞普蘭血藥濃度的測定快速準確，并很大程度上縮短樣品分析時間，且在分析中溶劑流速較低，減少了有機溶劑的使用，利于環保。

本發明采用以下技術方案：

本發明的一種檢測血液中西酞普蘭藥物濃度的方法，其中：它包括以下步驟：

(一)標準溶液的標定

首先將至少三種不同濃度的標準工作液20μL分別和10μL內標工作液及由1∶1的甲醇和水組成的170μL復溶液混合制成至少三種標準溶液，上述標準溶液分別在轉速為1200-2000rpm下渦旋混勻30s-2min后，使用液相色譜分析儀器和熒光檢測器對上述標準溶液進行檢測，得出上述至少三種標準溶液的西酞普蘭和內標色譜圖，在上述西酞普蘭和內標色譜圖中分別得到標準目標物峰面積與內標物峰面積，以上述至少三個標準目標物峰面積與內標物峰面積的比值作為標準曲線圖的縱坐標y，以上述標準工作液濃度與內標工作液濃度的比值即相對濃度為作為標準曲線圖的橫坐標x，將以上檢測所得至少三組數據進行線性回歸，擬合得到標準曲線方程為y＝a*x+b，并且得出權重系數a和b；所述標準工作液為西酞普蘭溶液，所述內標工作液為環庚米特溶液；

(a)標準工作液的配制：

精確稱取西酞普蘭標準品3.63mg置于10ml容量瓶，用含水量為0％-25％的甲醇溶液進行溶解，并定容于10ml，得到標準儲備液A，即濃度為284μg/mL的西酞普蘭溶液，將標準儲備液A用含水量為25％-60％的甲醇溶液的稀釋液進行稀釋，分別在含有0.1-1.5μg/mL西酞普蘭的范圍內配置出各標準工作液，并在-80℃條件下保存；

(b)內標工作液的配制：