[發(fā)明專利]一種油棕體細(xì)胞懸浮培養(yǎng)獲得再生植株的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810073725.1 | 申請日： | 2018-01-25 |
| 公開（公告）號： | CN108094214B | 公開（公告）日： | 2019-12-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 潘登浪;李煒芳;鄒積鑫;曾憲海;林位夫;李哲;曾精 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 46001 海口翔翔專利事務(wù)有限公司 | 代理人： | 莫臻<國際申請>=<國際公布>=<進(jìn)入國 |
| 地址： | 57173*** | 國省代碼： | 海南;46 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 油棕 胚性細(xì)胞 懸浮培養(yǎng) 再生植株 體細(xì)胞 胚性愈傷組織 生物技術(shù)領(lǐng)域 生物技術(shù)育種 細(xì)胞懸浮培養(yǎng) 外植體材料 細(xì)胞全能性 懸浮細(xì)胞系 易碎 品種選育 生長條件 生理狀態(tài) 完整植株 現(xiàn)實(shí)意義 遺傳背景 增殖效率 直接誘導(dǎo) 種植材料 植株 無性系 芯葉 增殖 繁育 應(yīng)用 統(tǒng)一 | ||
1.一種油棕體細(xì)胞懸浮培養(yǎng)獲得再生植株的方法，其特征在于，其步驟如下：
1)、易碎胚性愈傷組織誘導(dǎo)：取成齡油棕芯葉作為外植體，切成小片，接種到胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在26～30℃下暗培養(yǎng)，110～130天獲得易碎胚性愈傷組織；
所述胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分和配比如下：NH4Cl 1100～1200mg/L+H3BO3 5～7mg/L+KNO3 2490～2510mg/L+Ca(NO3)2 585～615mg/L+NaH2PO4 140～160mg/L+MgSO4·7H2O 350～390mg/L+CuSO4·5H2O 0.023～0.027mg/L+Na2-EDTA 36.3～38.3mg/L+FeSO4·7H2O 27.3～28.3mg/L+MnSO4·4H2O 22.2～22.6mg/L+ZnSO4·5H2O 8.0～8.6mg/L+KI 0.79～8.7mg/L+Na2MoO4·2H2O 0.23～0.27mg/L+CoCl2·6H2O 0.024～0.026mg/L+肌醇80～120mg/L+煙酸0.2～0.8mg/L+鹽酸吡哆醇5～15mg/L+鹽酸硫胺素5～15mg/L+氨基乙酸2.0mg/L+德夸霉素5～10mg/L+15～30mg/L麥草畏+活性炭1000～2000mg/L+6000mg/L瓊脂+蔗糖45000mg/L+泛酸鈣0.5～5mg/L+生物素0.05～0.5mg/L+水解酪蛋白500～1000mg/L，培養(yǎng)基滅菌前調(diào)其pH5.6；
2)、懸浮培養(yǎng)：取易碎胚性愈傷組織，按質(zhì)量體積比為0.5～1：30的比例將易碎胚性愈傷組織加入到含有懸浮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中，置于往復(fù)式搖床上在100rmp、26～30℃、室內(nèi)自然散射光條件下培養(yǎng)，每7天繼代1次，每次繼代時傾去占總體積2/3的上清液，補(bǔ)充新鮮的懸浮培養(yǎng)液至原體積繼續(xù)培養(yǎng)，至少繼代3次；在繼代培養(yǎng)過程中，從繼代第3次開始，每次繼代傾去占總體積的2/3上清液并補(bǔ)充新鮮的液體培養(yǎng)液至原體積后，用20目已滅菌的不銹鋼篩網(wǎng)過濾懸浮細(xì)胞，只保留能通過20目篩網(wǎng)的懸浮細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，即獲得生長狀態(tài)均一、分散性好的細(xì)胞團(tuán)即懸浮細(xì)胞系懸浮液；
所述懸浮培養(yǎng)液的成分和配比如下：NH4Cl 1100～1200mg/L+H3BO35～7mg/L+KNO3 2490～2510mg/L+Ca(NO3)2 585～615mg/L+NaH2PO4 140～160mg/L+MgSO4·7H2O 350～390mg/L+CuSO4·5H2O 0.023～0.027mg/L+Na2-EDTA 36.3～38.3mg/L+FeSO4·7H2O 27.3～28.3mg/L+MnSO4·4H2O 22.2～22.6mg/L+ZnSO4·5H2O 8.0～8.6mg/L+KI 0.79～8.7mg/L+Na2MoO4·2H2O 0.23～0.27mg/L+CoCl2·6H2O 0.024～0.026mg/L+肌醇80～120mg/L+煙酸0.2～0.8mg/L+鹽酸吡哆醇5～15mg/L+鹽酸硫胺素5～15mg/L+氨基乙酸2.0mg/L+德夸霉素0.1～0.5mg/L+0.5～1.5mg/L麥草畏+蔗糖45000mg/L+泛酸鈣0.5～5mg/L+生物素0.05～0.5mg/L+水解酪蛋白500～1000mg/L，培養(yǎng)基滅菌前調(diào)其pH5.6；
3)、植株再生：取懸浮細(xì)胞系懸浮液，按體積比為1:45～55的比例將懸浮液移到分化培養(yǎng)基中，在26～30℃，2000lx光照下培養(yǎng)，90～100天獲得0.5～1cm大小的體胚；所述分化培養(yǎng)基是以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加蔗糖3000mg/L+瓊脂6000mg/L，pH6.0；
將獲得的0.5～1cm大小的體胚接種到體胚萌芽培養(yǎng)基中，在26～30℃，2000lx光照下培養(yǎng)，30～45天獲萌芽植株，萌芽植株繼續(xù)培養(yǎng)25～35天獲得完整植株，然后轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，在26～30℃，2000lx光照下進(jìn)行壯苗培養(yǎng)60天，達(dá)到長出2級根，3張葉片以上完整植株；所述體胚萌芽培養(yǎng)基是以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加蔗糖3000mg/L+瓊脂6000mg/L，pH6.0；所述壯苗培養(yǎng)基是以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加蔗糖3000mg/L，pH6.0。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所，未經(jīng)中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201810073725.1/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
- 固體－液體交替培養(yǎng)誘導(dǎo)雜交鵝掌楸液體懸浮細(xì)胞體胚高頻發(fā)生與植株再生方法
- 一種提高水曲柳體細(xì)胞胚發(fā)育同步化的方法
- 一種通過胚性細(xì)胞組織制備蛋白質(zhì)的方法
- 一種利用顛茄外植體誘導(dǎo)胚性細(xì)胞的方法
- 一種蔥蓮胚性細(xì)胞懸浮培養(yǎng)系的建立和植株再生的方法
- 一種白芨胚性細(xì)胞發(fā)生與子葉胚培養(yǎng)方法
- 一種閩楠體細(xì)胞胚及不定芽誘導(dǎo)方法
- 一種通過體細(xì)胞胚發(fā)生途徑獲得白刺花再生植株的方法
- 一種甘蔗熱帶種胚性細(xì)胞團(tuán)誘導(dǎo)方法
- 一種胚狀體培養(yǎng)基及其制備拐棗人工種子的方法
- 一種懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的方法
- 一種合歡細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)方法
- 一種適應(yīng)全懸浮培養(yǎng)的羊睪丸永生化細(xì)胞馴化方法
- 無血清懸浮培養(yǎng)型MDCK細(xì)胞株及其應(yīng)用
- 無血清懸浮培養(yǎng)型MDCK細(xì)胞株及其應(yīng)用
- 無血清懸浮培養(yǎng)型MDCK細(xì)胞株及其應(yīng)用
- 咖啡愈傷組織的懸浮培養(yǎng)方法
- 一種馬尾松胚性細(xì)胞增殖的懸浮培養(yǎng)方法
- 一種懸浮培養(yǎng)細(xì)胞單克隆篩選培養(yǎng)方法
- 動物細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)用添加物、懸浮培養(yǎng)用培養(yǎng)基和懸浮培養(yǎng)方法
