[發明專利]一株不產靈菌紅素的粘質沙雷氏菌及其制備舍雷肽酶的應用

在審

• 申請號: 201810073429.1
• 申請日: 2018-01-25
• 公開（公告）號: CN108148781A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 梅建鳳;蔡少芬;應國清;易喻;陳建澍;張彥璐
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/52;C12R1/43
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

本發明公開了一株不產靈菌紅素的粘質沙雷氏菌突變株及其制備舍雷肽酶的應用，粘質沙雷氏菌MW?9菌株不產靈菌紅素，有效地改善了成品舍雷肽酶的品質；粘質沙雷氏菌MW?9菌株產舍雷肽酶活性穩定，搖瓶發酵產酶活力穩定在1000U/mL左右。

(一)技術領域

本發明涉及一株不產靈菌紅素的粘質沙雷氏菌(Serratia marcescens)MW-9菌株，及其在發酵制備舍雷肽酶中的應用。

(二)背景技術

舍雷肽酶(serratiopeptidase，serrapeptase或serralysin)，又名沙雷肽酶、沙雷蛋白酶等，是一種源于粘質沙雷氏菌(Serratia marcescens)的堿性蛋白酶，最初產該酶的粘質沙雷氏菌E15菌株分離自家蠶蠶蛹腸道，蠶蛹就是利用腸道內粘質沙雷氏菌產生的舍雷肽酶破繭而出。舍雷肽酶被人們稱之為“奇跡之酶”，它有良好的抗炎、抗腫脹、促進痰液、膿液溶解與排泄以及鎮痛作用，臨床用于手術后及外傷的消炎；副鼻竇炎、乳汁潴留性乳腺炎、膀胱炎、附睪炎、智齒周圍炎及牙槽膿腫時的消炎；以及治療支氣管炎、肺結核、支氣管哮喘時痰液不易咳出等。研究也表明，舍雷肽酶具有出色的纖溶活性，在治療動脈粥樣硬化方面也有潛在的應用。目前市場上已有舍雷肽酶相關藥品，如國內市場上的“達先”、“釋瑞達”和“曲坦”等，國外市場上的“Dasen”和“Seradase”等；舍雷肽酶也可作為非處方藥使用，具有對抗炎癥、解除疼痛和腫脹，加速復原與激發免疫系統等功效，產品如市場上的“Serretia”、“Natto-Serra”和“SerraGold”膠囊等。

近些年來，因其良好的臨床使用效果，舍雷肽酶的使用量逐年增長，特別是為輔助治療藥物和保健食品的市場急劇增長。目前，國內雖有一些企業在銷售舍雷肽酶，但并非采用粘質沙雷氏菌發酵，而是采用枯草芽孢桿菌發酵的普通蛋白酶，此類產品不能稱為舍雷肽酶，所以國內舍雷肽酶類藥物的原料都從國外進口，也未見相關發酵工藝研究的報道。日本和印度工業化生產規模較大，國際市場多向這兩個國家采購，所以國內迫切需要開發具自主知識產權的舍雷肽酶生產工藝。

產舍雷肽酶的粘質沙雷氏菌，又名靈桿菌，是革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌，屬于腸桿菌科(Enterobacteriaceae)沙雷氏菌屬(Serrtia)。該菌的最大特征在28～30℃下培養產生鮮紅的色素—靈菌紅素(prodigiosin，又稱靈桿菌素)；高于37℃培養不產生紅色色素，靈菌紅素具有抗菌、抑癌、提高免疫力等生理活性，也具有一定的開發潛質。

中國發明專利CN201610407429.1公開了一株舍雷肽酶產生菌LL-413及其在發酵制備舍雷肽酶中的應用，所用的產酶菌株粘質沙雷氏菌LL-413分離自家蠶蠶蛹腸道，野生菌株在用于發酵生產舍雷肽酶中存在2個缺點，一是在30℃下產酶發酵，會產生紅色色素—靈菌紅素，酶的分離過程不能完全去除該色素，從而影響成品酶的色澤；二是產酶活力不穩定，隨著菌種傳代次數增多，產酶單位逐漸下降。為此，本發明對粘質沙雷氏菌LL-413進行了紫外線和微波連續誘變，選育出不產靈菌紅素，產酶活力高且穩定的突變株，應用于舍雷肽酶的生產。

(三)發明內容

本發明提供一株產舍雷肽酶的突變菌株—粘質沙雷氏菌(Serratia marcescens)MW-9菌株，及其在制備舍雷肽酶中的應用，該菌株具有的顯著優點是不產靈菌紅素且產酶活力穩定，有效地改善了發酵中產酶活力不穩定性和產品色澤差的問題。

本發明采用的技術方案為：

本發明提供一株產舍雷肽酶，但不產靈菌紅素的粘質沙雷氏菌(Serratiamarcescens)MW-9菌株，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號：GDMCC No:60315，保藏日期2018年1月18日，地址：廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓，郵編：510075。