[發明專利]融合牛抗菌肽與白細胞介素4/6共表達重組酵母菌制劑的制備及應用

有效

• 申請號: 201810073298.7
• 申請日: 2018-01-25
• 公開（公告）號: CN108276496B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 高榮;萬小平;肖永樂;馬常俊;黎淩;朱玉華;劉建華;田玉虎;呂學斌;王澤洲;李江淩
• 申請（專利權）人: 深圳市前海金卓生物技術有限公司;四川大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;A61K38/20;A61K38/17;A61P37/04;A61P1/14;A61P31/04;A61P31/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

本發明公開了抗菌肽融合細胞因子FBAPIL46共表達生物制劑的制備和應用。本發明所提供的抗菌肽融合細胞因子FBAPIL46為如下A1)、A2)或A3)：A1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白質；A2)將序列表中序列1所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質；A3)在A1)或A2)的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質。實驗證明，本發明的FBAPIL46可以促進淋巴細胞、紅細胞和白細胞的增殖，抑制致病微生物的生長，促進非特異性抗體(IgG、IgG1、IgG2a)及疾病特異抗體的分泌，提高動物的免疫能力與存活率。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種融合牛抗菌肽與白細胞介素4/6共表達重組酵母菌制劑的制備及應用。

背景技術

目前中國畜禽養殖業隨著集約化程度提高，畜禽養殖規模和養殖密度日益擴大，迫于控制30多種傳染性病原感染傳播擴散的壓力，尤其是禽流感和呼吸繁殖綜合癥等烈性病相繼循環爆發，動物養殖中耐藥菌引起的腹瀉，沙門、大腸桿菌、鏈球菌、藍耳病(PRRSV)、圓環病毒(PCV2)、豬瘟(CSFV)等各種細菌、病毒性疾病，長期以來是畜牧養殖中瓶頸限制問題，嚴重阻礙畜牧業的發展；使抗生素等藥物添加劑在飼料的濫用情況非常嚴重，畜禽疾病和抗生素飼料添加劑的公害問題已經成為制約我國畜禽養殖業發展水平和經濟效益提高的瓶頸。飼料抗生素添加劑的濫用不僅提高飼養成本，也導致病原微生物的耐藥性和致病力明顯增強，嚴重破壞了動物消化道的微生態平衡，長期使用后在動物體內殘留、并富集，畜禽機體因藥物毒副作用而削弱健康水平，免疫抗病力顯著下降。如此惡性循環，畜禽各種烈性傳染疾病頻繁發生，難于控制和治療。而另一方面，藥物殘留及日益嚴重的畜禽產品食品安全問題，不僅直接威脅著人類自身的健康，也阻礙了養殖業的發展。

動物飼料添加抗生素，長期或不適當使用不僅將誘導病菌出現抗藥性，而且在動物產品出現藥物殘留，造成嚴重的食品安全隱患，損害人類健康以及招致治療抗生素的藥物失效。歐盟、美國等發達地區2006年開始全面限制抗生素作為飼料添加劑。我國也嚴格限制飼料添加抗生素。現代養殖業急需開發取代傳統抗生素的無殘留、無抗性誘導、安全無污染的新型生物飼料及其添加劑。

目前少見有關抗菌肽基因與其它免疫基因融合克隆和表達的報道。本發明通過基因重組、融合具有抗細菌和病毒等多種活性的抗菌肽基因和白細胞介素4/6免疫調節基因，將其連接到真核酵母表達技術獲得融合蛋白，進一步研究融合蛋白的免疫調節效應及其抗菌防感染活性，獲得廣譜高效抗微生物以及免疫調節作用強的重組蛋白。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何提高動物的免疫能力。

為解決上述技術問題，本發明提供了一種蛋白質，名稱為FBAPIL46，包括牛抗菌肽和白細胞介素4/6。

上述蛋白質為如下a)-e)中任一種蛋白質：

a)氨基酸序列包括序列表中序列1所示的氨基酸序列的蛋白質；

b)氨基酸序列由序列表中序列1所示的氨基酸殘基組成；

c)將a)或b)所限定的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有提高動物免疫能力功能的蛋白質；

d)與a)或b)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有提高動物免疫能力功能的蛋白質；

e)a)-d)中任一所限定的蛋白質的N端和/或C端連接標簽后得到的融合蛋白。

編碼上述蛋白的核酸分子也是本發明保護的范圍。

上述核酸分子為如下1)-4)中任一種所示的核酸分子：

1)其編碼序列包括序列表中序列2；

2)其編碼序列為序列表中序列2；