[發明專利]一種檢測汞離子的生物傳感器

有效

• 申請號: 201810072952.2
• 申請日: 2018-01-25
• 公開（公告）號: CN108359714B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 黃加棟;王敬鋒;王玉;劉素
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: C12Q1/6825
• 分類號: C12Q1/6825;C12Q1/6876
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

1.一種基于鄰近表面雜交分析和滾環擴增檢測汞離子的生物傳感器，其特征在于，包括：

a）雜交體系，包括T4 DNA連接酶，S1、S2兩條寡鏈DNA和Padlock探針；

b）擴增體系：包括引物、phi29聚合酶和dNTP；

c）熒光體系：核酸內切酶IV和熒光探針；

所述S1寡鏈DNA序列如SEQ No. 1所示；所述S2寡鏈DNA序列如SEQ No. 2所示；所述Padlock探針序列如SEQ No. 3所示；

所述引物序列如SEQ No. 4所示；

所述熒光探針序列如SEQ No. 5所示，5’端第5堿基為一個無堿基位點，該位點前及相鄰堿基后分別修飾熒光基團和相應熒光猝滅基團。

2.根據權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，所述熒光探針的熒光基團與相應熒光猝滅基團為6-羧基熒光素和4-(4’-二甲基氨基偶氮苯基)苯甲酸。

3.一種利用權利要求1或2所述的生物傳感器在非疾病診斷領域檢測汞離子的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將S1、S2和padlock探針的溶液，T4 DNA連接酶溶液，10×的T4 DNA連接酶緩沖液，滅菌水加入到EP管中，再加入待測樣品溶液或系列汞離子標準溶液反應；

（2）將Primer、phi29聚合酶和dNTP的溶液，10×的Phi29 DNA聚合酶緩沖液加入步驟（1）的EP管中反應；

（3）向步驟（2）的EP管中加入熒光探針溶液和核酸內切酶IV溶液反應；

（4）將步驟（3）中的反應液進行熒光檢測，根據汞離子標準溶液的熒光強度作標準曲線，得回歸方程，計算待測樣品中的汞離子濃度。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（1）中反應溫度為16 ℃-25 ℃，反應時間為16 h-24 h。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（2）和（3）中反應溫度為37 ℃，反應時間為2 h。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟（4）熒光檢測的條件為：激發波長486nm，發射波長518nm，檢測范圍450 nm-530 nm。

7.根據權利要求3-6任一所述的方法，其特征在于，汞離子檢測濃度為1 μM-10μM。