[發(fā)明專利]一種用加速溶劑萃取儀從雞組織、雞蛋及豬肉中提取哌嗪殘留并衍生化的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810072194.4
• 申請日: 2018-01-25
• 公開（公告）號: CN108169391A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝愷舟;張楊楊;龐茂達;謝星;王波;王雅娟;趙霞;卜曉娜;郭亞文;劉楚君;施會強;張跟喜;戴國俊;王冉;張濤;高玉時;王金玉
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州大學(xué)
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 南京知識律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

本發(fā)明涉及一種用加速溶劑萃取儀從雞組織、雞蛋及豬肉中提取哌嗪殘留并衍生化的方法。該方法是：空白樣品硅藻土研磨后，裝入萃取池中用ASE萃取，先后用正己烷和甲酸乙腈靜態(tài)萃取；萃取液經(jīng)Strata?X?C小柱凈化后，收集樣品溶液置于氮吹儀中吹干；再用乙腈復(fù)溶，超聲，搖勻，移取三乙胺和丹磺酰氯溶液，用乙腈定容，避光反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后過0.22μm有機相針式濾器，濾液供HPLC?FLD檢測。采用本發(fā)明的方法，哌嗪在雞組織、雞蛋及豬肉中添加濃度為LOQ的提取回收率均大于或等于72.86％，添加濃度為0.5MRL、1.0MRL、2.0MRL的提取回收率均大于或等于82.26％，滿足獸藥殘留檢測方法的需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及獸藥殘留檢測領(lǐng)域，具體涉及一種用加速溶劑萃取儀從雞組織、雞蛋及豬肉中提取哌嗪殘留并衍生化的方法。

背景技術(shù)

在對動物源性食品中的獸藥進行檢測時，只有將藥物從樣本中提取出來，才可能建立起高效的檢測方法。哌嗪為白色針狀晶體，弱堿性，極性較大，易溶于水、甲醇、乙腈。哌嗪無紫外、熒光基團，需要與熒光試劑反應(yīng)生成具有紫外或熒光的物質(zhì)，以便熒光檢測器的檢測。國內(nèi)關(guān)于雞組織、雞蛋及豬肉中提取哌嗪的方法主要為液-液萃取法，提取劑一般為酸性水溶液和乙腈溶液。但目前為止，采用加速溶劑萃取技術(shù)提取雞組織、雞蛋及豬肉中哌嗪殘留并用丹磺酰氯(DNS-Cl)衍生化的方法在國內(nèi)尚未見報道。加速溶劑萃取技術(shù)具有溶劑用量少、萃取速度快、效率高、回收率高、重現(xiàn)性好和自動化程度高等優(yōu)勢被廣泛應(yīng)用在獸藥殘留分析領(lǐng)域。哌嗪是一種六元雜環(huán)胺，屬于胺類化合物，能與常用的衍生試劑(如苯甲酰氯，丹磺酰氯、鄰苯二甲醛)發(fā)生取代反應(yīng)。但哌嗪與DNS-Cl反應(yīng)條件要求嚴格，如三乙胺和衍生試劑的用量、溫度等，不采用加速溶劑萃取技術(shù)，與哌嗪衍生化效率低、衍生產(chǎn)物不穩(wěn)定、提取效率低、結(jié)果重現(xiàn)性差。因此，本發(fā)明采用加速溶劑萃取技術(shù)提取雞組織、雞蛋及豬肉中哌嗪殘留并用丹磺酰氯衍生化。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決從雞組織、雞蛋及豬肉中提取哌嗪并衍生化的問題，本發(fā)明采用加速溶劑萃取(ASE)技術(shù)提取雞組織、雞蛋及豬肉中哌嗪殘留，并用DNS-Cl與其發(fā)生衍生反應(yīng)。

在試驗中發(fā)現(xiàn)，在低溫條件下或提取試劑為酸性水溶液時，用ASE提取樣品后，提取液渾濁且有大量絮狀物，不利于樣品的衍生化；溫度過高后時，哌嗪提取回收率不太理想。因此，對溫度和提取試劑進行優(yōu)化，最終選擇溫度為80℃，以2％甲酸乙腈為提取試劑，該方法樣品基質(zhì)影響小、提取效率高、回收率高。

哌嗪與DNS-Cl反應(yīng)對反應(yīng)條件的要求嚴格，三乙胺和衍生試劑的用量過少反應(yīng)不完全，不利于結(jié)果的準(zhǔn)確定量；用量過多浪費試劑。溫度過低不利于反應(yīng)的進行且耗時；溫度過高易導(dǎo)致衍生試劑或衍生產(chǎn)物的分解。本發(fā)明在試驗條件下，哌嗪與DNS-Cl反應(yīng)生成的衍生產(chǎn)物帶有強的熒光基團，且結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定，能準(zhǔn)確定性、定量并成功應(yīng)用于液相色譜熒光檢測法的分析。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種用加速溶劑萃取儀從雞組織、雞蛋及豬肉中提取哌嗪殘留并衍生化的方法，是：準(zhǔn)確稱取(2.0±0.02)g均質(zhì)好的空白樣品放于研缽中，并加入4.0g硅藻土研磨，為了達到最佳的萃取效率，盡可能將樣品研磨成小顆粒，裝入22mL的萃取池中，在1500psi，80℃條件下用ASE萃取，每個萃取池首先用正己烷靜態(tài)萃取1次，棄掉萃取液；再用2％甲酸乙腈靜態(tài)萃取2次，收集的萃取液；萃取液經(jīng)Strata-X-C小柱凈化，凈化后的樣品溶液用15mL離心管收集，置于氮吹儀中吹干；再氮吹后的樣品用1.0mL乙腈復(fù)溶，超聲10min，搖勻，移取100μL 0.12％三乙胺和600μL 1.0mg/mL丹磺酰氯溶液，用乙腈定容至2.0mL，置于50℃環(huán)境下避光反應(yīng)20min，待反應(yīng)結(jié)束后，渦旋1min，過0.22μm有機相針式濾器，濾液供HPLC-FLD檢測。