[發明專利]一種基于金納米棒檢測脂肪酶活的比色法

在審

• 申請號: 201810071953.5
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108287238A
• 公開（公告）日: 2018-07-17
• 發明（設計）人: 田丹碧;張凌華;朱杰;吳勝男;張浩
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種簡單廉價的比色法檢測脂肪酶活。本發明以金納米棒作為換能元件，吐溫作為脂肪酶識別元件，建立了檢測脂肪酶活的比色法。在這個方法中，利用了吐溫分子中的環氧結構以及酯基結構。吐溫的環氧結構可自氧化產生過氧化氫，它作為還原劑可將溶液中的氯金酸還原成金屬金沉積到金納米棒的表面，從而改變了金納米棒的縱橫比，又由于吐溫結構中存在酯基，可作為脂肪酶的底物被脂肪酶催化水解，使原來的吐溫分子結構發生變化，從而控制了吐溫自氧化的速度，也控制了金納米棒的縱橫比，由此發展出一種操作簡單，方便快捷，靈敏準確的脂肪酶活檢測的比色分析法。

技術領域

本發明屬于分析化學領域，具體涉及一種以金納米棒作為換能元件，吐溫作為脂肪酶識別元件，用于檢測脂肪酶活的納米生物傳感器。

背景技術

脂肪酶(lipase，EC 3.1.1.3)可以催化三酰甘油酯及其他一些水不溶性酯類的水解、醇解、酯化、轉酯化及酯類的逆向合成，在快速發展的生物工程中已被視為一種重要的工業用酶，現廣泛應用于奶制品、洗滌劑、食品和制藥等行業。隨著脂肪酶的應用領域和市場規模不斷的擴大，建立一種簡單、快捷、高通量及高靈敏度的脂肪酶活檢測方法顯得尤為重要。

脂肪酶是一種界面反應酶，它的催化機理和大多數酶有所不同，其催化過程不是在均相體系中而是發生在油水界面上。現有脂肪酶活的檢測方法很多，如光譜法、恒電位滴定法、色譜法、濁度法、界面張力測量法及電導法等，其中最為常用的方法是光譜法和恒電位滴定法，使用的底物主要是三油酸甘油酯、三丁酸甘油酯和橄欖油等，都需要對底物進行乳化，乳化劑的加入會對酶的檢測產生影響。另外，光譜法雖然操作簡單快速，但是所使用的顯色劑對硝基苯酚p-NPP價格昂貴，且易發生水解，對脂肪酶活的檢測有較大的干擾。

金納米棒因能高靈敏度測定酶活而得到廣泛的應用，Linlin Lu等人利用金納米棒頭碰頭連接來檢測乙酰膽堿酯酶，Laura Saa等人采用金納米棒的蝕刻來檢測人體血液中的葡萄糖， Juhong Chen等人基于金屬離子在金納米棒上的沉積對大腸桿菌進行檢測等，這些方法基于金納米棒構建生物傳感器進行目標物檢測，簡化了實驗步驟，并具有較高的靈敏度，在臨床醫學、材料科學、生命科學等領域均獲得廣泛的應用。

現有未公開基于金納米棒作為生物傳感器來比色檢測脂肪酶活的技術方案。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于金納米棒用于簡單、快捷、可視化的脂肪酶活檢測方法。此方法首次將金納米棒比色法與脂肪酶活檢測相結合。

為實現發明目的，本發明采用如下的技術方案：

(1)高縱橫比金納米棒的合成；

(2)吐溫水解試樣的制備；

(3)將步驟(2)由不同脂肪酶濃度水解的吐溫試樣溶液加入到含有氯金酸、金納米棒的溶液體系中，再加入緩沖溶液來調節體系的pH和離子強度，混勻，用超純水補足至1000μL，移取200μL反應溶液到96孔酶標板中，在波長范圍在400-950nm檢測其吸光度，以吸光強度作為縱坐標，波長為橫坐標，繪制標準曲線。

本發明所述的檢測脂肪酶活的多重比色法，步驟(1)所述使用是高縱橫比的金納米棒，金棒的縱橫比為5.0。

本發明所述的檢測脂肪酶活的多重比色法，步驟(2)所述使用底物吐溫的濃度為24.44mmol/L。本發明所述的檢測脂肪酶活的多重比色法，所述的步驟(3)的緩沖溶液為磷酸(PB)緩沖溶液，該緩沖液的濃度及具體用量為本領域技術人員所理解和掌握，調節反應溶液的pH為7.0。本發明所述的檢測脂肪酶活的多重比色法，所述的步驟(3)使用0.01mol/L磷酸(PB)緩沖溶液調節反應溶液的離子強度。

本發明所述的檢測脂肪酶活的多重比色法，所述的步驟(3)反應溶液中氯金酸的濃度為 20mmol/L。

附圖說明