[發(fā)明專利]一種虹鱒傳染性造血器官壞死病毒（IHNV）滅活疫苗的制備方法及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810070400.8
• 申請日: 2018-01-24
• 公開（公告）號: CN108114275A
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發(fā)明（設計）人: 魏文燕;汪開毓;李良玉;楊馬;楊倩;劉韜;唐洪;張小麗;劉家星;朱玲;楊壯志;何潔;陳霞;何琦瑤;陳健;何晟毓
• 申請（專利權）人: 成都市農(nóng)林科學院;四川農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: A61K39/205
• 分類號: A61K39/205;A61P31/14;C12N7/00;C12N7/02;C12N7/06
• 代理公司: 成都厚為專利代理事務所(普通合伙) 51255
• 代理人: 夏柯雙

本發(fā)明公開了一種虹鱒傳染性造血器官壞死病毒（IHNV）滅活疫苗的制備方法，包括如下步驟：S1.FHM細胞復蘇提純；S2.FHM細胞基礎培養(yǎng)；S3.FHM細胞擴大培養(yǎng)；S4.IHNV病毒培養(yǎng)；S5.IHNV病毒提純；S6.IHNV病毒滅活。該方法制備得到IHNV滅活疫苗應用于預防傳染性造血器官壞死病；通過該方法可成功制得IHNV滅活疫苗，滅活效果好，滅活疫苗安全性高，相對免疫保護率高，同時該制備方法工藝簡單，有利于縮減疫苗大規(guī)模生產(chǎn)的周期和成本，可用于工業(yè)制備IHNV滅活疫苗用于預防傳染性造血器官壞死病。

技術領域

本發(fā)明涉及一種虹鱒傳染性造血器官壞死病毒（IHNV）滅活疫苗的制備方法及其應用。

背景技術

虹鱒是一種名貴的冷水性魚類，其肉質鮮嫩、味美，蛋白質和脂肪含量高，膽固醇含量幾乎等于零，EPA含量高于其它魚類數(shù)倍以上，具有“水中人參”的美譽，因此廣受人們喜愛。我國自1959年起開始養(yǎng)殖虹鱒，主要品種包括硬頭鱒、道納爾遜氏超級虹鱒、Jalo品系虹鱒和金鱒（黃虹鱒）等。目前我國虹鱒養(yǎng)殖場400多家，分布于23個省、市、自治區(qū)的100個縣內(nèi)，養(yǎng)殖方式多為高密度流水養(yǎng)殖。然而，近年來由于虹鱒養(yǎng)殖規(guī)模逐步地擴大，苗種需求量增加，魚卵、魚苗流通性的增大，且高密度養(yǎng)殖，造成了虹鱒各種疾病頻繁地發(fā)生，特別是傳染性疾病，如傳染性造血器官壞死病，給虹鱒的養(yǎng)殖帶來極大經(jīng)濟損失，嚴重地制約著虹鱒養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

傳染性造血器官壞死病（Infectious Hematopoietic Necrosis, IHN）是由傳染性造血器官壞死病毒（Infectious Hematopoietic Necrosis Virus, IHNV）所引起的一種鮭科魚類急性死亡的病毒性傳染病，呈現(xiàn)快速傳播與廣泛發(fā)生的特征。該病被OIE列為必須申報的動物疫病，是魚類進出口岸第1類檢疫對象。2014年我國農(nóng)業(yè)部將其列為《2014年國家水生動物疫情監(jiān)測計劃》的重點專項監(jiān)測疫病之一。自1985年IHN疫情首次在中國出現(xiàn)以來，IHN已經(jīng)先后在黑龍江、遼寧、青海、北京、甘肅、吉林、山東以及四川等地暴發(fā)，死亡率可高達100%，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。

IHNV屬于彈狀病毒科（Rhabdoviridae），諾拉彈狀病毒屬（Novirhabdovirus）。其外形為子彈狀，含二十面立體對稱型核衣殼，長150 nm-190 nm，直徑65 nm-75nm，為單股負鏈RNA病毒。IHNV含有脂蛋白包膜，表面有纖細的刺突，與狂犬病毒的蛋白結構類似，能在多種細胞系上生長，包括大鱗大馬哈魚胚細胞系(Chinook salmon embryo, CHSE-14)、鯉魚上皮瘤細胞系(Epithelioma papulossum of carp, EPC)、肥頭鰷魚細胞(Fatheadminnow, FHM)、虹鱒性腺細胞系(Rainbow trout gonad, RTG-2)、藍鰓太陽魚成纖維細胞系(Bluegill fry, BF-2)等。該病毒的增殖溫度范圍為4℃-20℃，其最適增殖溫度為15℃，細胞病變主要表現(xiàn)為細胞變圓，細胞脫落，出現(xiàn)空斑且空斑邊緣細胞牽拉，成葡萄狀。

IHNV的易感對象主要為鮭、鱒魚類的魚苗或者幼魚；IHNV敏感的宿主包括大麻哈魚屬的紅大麻哈魚、虹鱒、大鱗大麻哈魚、細磷大麻哈魚、大麻哈魚、馬蘇大麻哈魚、克氏鮭和玫瑰大麻哈魚。成魚感染通常不會出現(xiàn)死亡，而是成為病毒的傳染宿主。當幼魚和魚苗感染后，其臨床癥狀表現(xiàn)為眼球突出，鰓絲蒼白，鰭條基部充血，體色發(fā)黑，腹部膨大，肛門處常拖著一條黃色的粘液糞便，解剖可見肝蒼白，腎臟常呈現(xiàn)花斑狀，胃、腸內(nèi)有大量微黃、渾濁的粘液。幼魚也常常變現(xiàn)出一些神經(jīng)癥狀，包括打轉，痙攣，時在劇烈抽搐后死亡。

現(xiàn)有養(yǎng)殖場等一般對感染IHN的病魚采取的措施是全部銷毀，并對養(yǎng)殖場地和設備進行全面消毒；但是此種方法不能從根源上有效降低虹鱒等感染IHN的發(fā)病率。同時現(xiàn)有IHNV病毒滅活疫苗的制備成本高，工藝復雜，滅活時間長，同時疫苗的滅活效果不佳，導致IHNV病毒滅活疫苗制備效率不高。

發(fā)明內(nèi)容