[發明專利]檢測β-D-葡萄糖醛酸苷酶的底物及其制備方法和試劑盒

在審

• 申請號: 201810068438.1
• 申請日: 2018-01-24
• 公開（公告）號: CN108129530A
• 公開（公告）日: 2018-06-08
• 發明（設計）人: 蘇宏文;賴華;梁偉業;劉志文
• 申請（專利權）人: 廣東優尼德生物科技有限公司;賽馳生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: C07H15/26
• 分類號: C07H15/26;C07H1/00;C12Q1/34
• 代理公司: 上海點威知識產權代理有限公司 31326
• 代理人: 許曉琳

本發明公開了一種用于檢測β?D?葡萄糖醛酸苷酶的底物，具體為百里酚酞?α?D?葡糖醛酸，其制備方法包括如下步驟：將百里酚酞與乙酰溴?α?D?葡萄糖酮酸甲基酯反應制得百里酚酞?α?乙酰基?D?葡糖醛酸甲酯，脫除乙酰基得到百里酚酞?α?D?葡糖醛酸甲酯，然后經水解反應得到百里酚酞?α?D?葡糖醛酸。本發明百里酚酞?α?D?葡糖醛酸作為檢測β?D?葡萄糖醛酸苷酶的底物，具有性質穩定不易變質，顯色靈敏的優點，并且合成過程簡單，可顯著降低成本。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體涉及一種用于檢測β-D-葡萄糖醛酸苷酶的底物及其制備方法，以及用于檢測β-D-葡萄糖醛酸苷酶的試劑盒。

背景技術

滴蟲性陰道炎是由毛滴蟲引起，滴蟲是一種極微小有鞭毛的原蟲生物，用肉眼無法看到，需要在顯微鏡下觀察。寄生人體的毛滴蟲有陰道毛滴蟲、人毛滴蟲和口腔毛滴蟲，分別寄生于泌尿生殖系統、腸道和口腔，與皮膚病有關的是陰道毛滴蟲，引起滴蟲性陰道炎。是一種主要通過性交傳播的寄生蟲疾病，具有傳染性。滴蟲陰道炎患者的陰道pH值一般為5.1～5.4。隱藏在腺體及陰道皺襞中的滴蟲于月經前后，常得以繁殖，引起炎癥的發作。它能消耗或吞噬陰道上皮細胞內的糖原，阻礙乳酸生成。陰道滴蟲長期存在陰道內會損傷子宮頸，導致子宮頸反復發炎癥狀，長此以往有導致子宮頸癌的危險。

研究證實，陰道分泌物中β-D-葡萄糖醛酸苷酶活性與滴蟲之間存在相關性，原因是滴蟲患者陰道內需氧菌產生大量β-D-葡萄糖醛酸苷酶，使得其陰道分泌物β-D-葡萄糖醛酸苷酶活性顯著增高，而非滴蟲患者的婦女陰道分泌物中的β-D-葡萄糖醛酸苷酶活性正常。

目前大部分采用5-溴-4-氯-3-吲哚-Alpha-D-葡糖醛酸為底物，檢測β-D-葡萄糖醛酸苷酶活性。此底物主要存在以下問題：1、顯色不靈敏，容易把弱陽性漏檢；2、底物不穩定，需要在-20℃下保持，否則容易變質；3、合成難度大，價格昂貴。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測β-D-葡萄糖醛酸苷酶的底物及其制備方法和試劑盒，以解決背景技術存在的上述缺陷。

本發明是通過如下的技術方案實現的：

一種檢測β-D-葡萄糖醛酸苷酶的底物，具體為百里酚酞-α-D-葡糖醛酸，其化學結構式如下：

該化合物物性參數如下：

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz):δ1.33(m,12H),2.29(s,6H),3.12(m,2H),3.49(m,1H),3.73(m,1H),3.91(m,1H),4.55(m,1H),4.71(m,1H),4.82(m,1H),4.87(1H,m),5.88(m,1H),6.38(s,2H),6.85(1H,2H),7.45(m,4H),7.91(s,2H),11.21(s,1H)。

分子量：606。

本發明還公開了上述檢測β-D-葡萄糖醛酸苷酶的底物的制備方法，包括如下步驟：將百里酚酞與乙酰溴-α-D-葡萄糖酮酸甲基酯反應制得百里酚酞-α-乙酰基-D-葡糖醛酸甲酯，脫除乙酰基得到百里酚酞-α-D-葡糖醛酸甲酯，然后經水解反應得到百里酚酞-α-D-葡糖醛酸。

優選的，所述百里酚酞-α-乙酰基-D-葡糖醛酸甲酯是通過如下方法制備的：將百里酚酞、四丁基硫酸氫銨(TBAHS)和乙酰溴-α-D-葡萄糖酮酸甲基酯溶于二氯甲烷中,然后加入碳酸鉀水溶液充分反應，分離有機相經濃縮提純后得到所述百里酚酞-α-乙酰基-D-葡糖醛酸甲酯。

其中，百里酚酞、四丁基硫酸氫銨和乙酰溴-α-D-葡萄糖酮酸甲基酯的摩爾比為1：1：1。

優選的，采用甲醇/甲醇鈉體系脫除百里酚酞-α-乙酰基-D-葡糖醛酸甲酯中的乙酰基。