[發明專利]一種新型釀酒酵母表達體系及其構建方法

有效

• 申請號: 201810068015.X
• 申請日: 2018-01-24
• 公開（公告）號: CN108410902B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 鮑曉明;徐麗麗;邱晨曦;李洪興;易勇;張繼祥;付傳超;王棟
• 申請（專利權）人: 齊魯工業大學;山東圣琪生物有限公司
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N15/65;C12R1/865
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 耿媛媛

1.一種釀酒酵母表達體系，由表達載體轉染宿主構成，其特征在于，所述表達載體為環狀，是構建于釀酒酵母和大腸桿菌間的穿梭質粒載體，該載體從5’到3’依次包括以下可操作性元件：YEplac195質粒骨架、外源或內源基因表達盒、篩選標記基因表達盒；

所述YEplac195質粒是酵母附加體質粒，含有酵母2μ質粒的ori；

所述外源或內源基因表達盒自上游至下游依次為rDNA啟動子、內部核糖體進入位點序列、外源或內源基因表達框、poly(T)序列、rDNA終止子；

所述篩選標記基因表達盒為啟動子、篩選標記基因以及轉錄終止子；

所述外源或內源基因表達框中外源或內源基因為尿嘧啶基因或GFP基因；

所述外源或內源基因表達盒中的rDNA啟動子和rDNA終止子，序列分別如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示；

所述外源或內源基因表達盒中的內部核糖體進入位點序列，序列如SEQ ID No:3所示；

所述外源或內源基因表達盒中的poly(T)序列，序列如SEQ ID No:5所示；

所述的尿嘧啶基因來源于釀酒酵母，序列如SEQ ID No:4所示。

2.根據權利要求1所述的釀酒酵母表達體系，其特征在于，所述篩選標記基因表達盒中包括至少一個的篩選標記基因；所述篩選標記基因表達盒中的啟動子，序列如SEQ ID NO:8所示；所述篩選標記基因表達盒中的終止子，序列如SEQ ID NO:9所示。

3.根據權利要求1所述的釀酒酵母表達體系，其特征在于，所述篩選標記基因為潮霉素B抗性基因和/或G418抗性基因；所述的潮霉素B抗性基因，序列如SEQ ID NO:6所示；所述的G418抗性基因，序列如SEQ ID NO:7所示。

4.一種權利要求1所述的釀酒酵母表達體系的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)釀酒酵母表達體系的表達載體構建；

(2)外源或內源基因表達：將基因編碼框插入所述表達載體的外源基因插入酶切位點，獲得重組表達載體；將所述重組表達載體轉化宿主菌釀酒酵母；篩選并驗證宿主菌釀酒酵母陽性轉化子。

5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，步驟(2)中重組表達載體轉化宿主菌釀酒酵母的方法為PEG-LiAc轉化法、電轉化法以及原生質體轉化法。