[發明專利]一種育種改進的玉米SSR標記快速銀染檢測方法在審
| 申請號： | 201810067748.1 | 申請日： | 2018-01-24 |
| 公開（公告）號： | CN108165614A | 公開（公告）日： | 2018-06-15 |
| 發明（設計）人： | 林曙東 | 申請（專利權）人： | 安徽天勤農業科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6858 | 分類號： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 上海精晟知識產權代理有限公司 31253 | 代理人： | 馮子玲 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 顯影 快速銀染 玉米種子 染色 育種 讀取 快速銀染法 染色背景 玉米育種 育種單位 玉米 檢測 帶型 洗脫 改進 清晰 加深 | ||
1.一種育種改進的玉米SSR標記材料，其特征在于，包括玉米種子：所述玉米種子為28個不同育種單位提供。
2.如權利要求1所述的一種育種改進的玉米SSR標記快速銀染檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟一，取所述玉米種子加液氮研磨成粉末狀，轉入1.5ml的離心管中，-20℃冰箱保存；
步驟二，加入600ul65℃的十六烷基三甲基溴化銨混勻并置于65℃的水浴中保溫30-60min；
步驟三，取出，冷卻，上下搖勻，后加入600ul24：1的氯仿異戊醇；
步驟四，12000轉/min離心10min，取上清液與另一個1.5ml的離心管中；
步驟五，加異丙醇，12000轉/min離心10min，倒掉上清液；
步驟六，干后用100％的酒精清洗；
步驟七，PCR擴增包括如下步驟：
①取20ul反應液混勻并置于94℃的水浴中保溫5min預變性，1個循環；
②依次放置于：94℃的水浴中保溫變性40s、60℃的水浴中保溫退火35s、72℃的水浴中保溫延伸45s，共35個循環；
步驟八，擴增產物電泳分離包括如下步驟：
①準備電極液；
②將梳子撥出，并迅速用電極液沖洗膠面；
③不預電泳；
④點樣，電泳220V；
步驟九，向電泳液中加入染色劑染色5min，再滴入顯影液顯影。
3.根據權利要求2所述的一種育種改進的玉米SSR標記快速銀染檢測方法，其特征在于，步驟七中所述反應液包括10mmol/L Tris-HCl、50mmol/L KCl、2.5mmol/L MgCl2、0.25umol/L SSR引物。
4.根據權利要求2所述的一種育種改進的玉米SSR標記快速銀染檢測方法，其特征在于，步驟九所述染色劑包括10％乙醇、0.5％乙酸和0.2％AgNO3；所述液顯影包括3％NaOH、0.5％甲醛。
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