[發(fā)明專(zhuān)利]一種育種改進(jìn)的玉米SSR標(biāo)記快速銀染檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810067748.1
• 申請(qǐng)日: 2018-01-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108165614A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林曙東
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 安徽天勤農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6858
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6858
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種育種改進(jìn)的玉米SSR標(biāo)記材料，其特征在于，包括玉米種子：所述玉米種子為28個(gè)不同育種單位提供。

2.如權(quán)利要求1所述的一種育種改進(jìn)的玉米SSR標(biāo)記快速銀染檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，取所述玉米種子加液氮研磨成粉末狀，轉(zhuǎn)入1.5ml的離心管中，-20℃冰箱保存；

步驟二，加入600ul65℃的十六烷基三甲基溴化銨混勻并置于65℃的水浴中保溫30-60min；

步驟三，取出，冷卻，上下?lián)u勻，后加入600ul24：1的氯仿異戊醇；

步驟四，12000轉(zhuǎn)/min離心10min，取上清液與另一個(gè)1.5ml的離心管中；

步驟五，加異丙醇，12000轉(zhuǎn)/min離心10min，倒掉上清液；

步驟六，干后用100％的酒精清洗；

步驟七，PCR擴(kuò)增包括如下步驟：

①取20ul反應(yīng)液混勻并置于94℃的水浴中保溫5min預(yù)變性，1個(gè)循環(huán)；

②依次放置于：94℃的水浴中保溫變性40s、60℃的水浴中保溫退火35s、72℃的水浴中保溫延伸45s，共35個(gè)循環(huán)；

步驟八，擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分離包括如下步驟：

①準(zhǔn)備電極液；

②將梳子撥出，并迅速用電極液沖洗膠面；

③不預(yù)電泳；

④點(diǎn)樣，電泳220V；

步驟九，向電泳液中加入染色劑染色5min，再滴入顯影液顯影。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種育種改進(jìn)的玉米SSR標(biāo)記快速銀染檢測(cè)方法，其特征在于，步驟七中所述反應(yīng)液包括10mmol/L Tris-HCl、50mmol/L KCl、2.5mmol/L MgCl₂、0.25umol/L SSR引物。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種育種改進(jìn)的玉米SSR標(biāo)記快速銀染檢測(cè)方法，其特征在于，步驟九所述染色劑包括10％乙醇、0.5％乙酸和0.2％AgNO₃；所述液顯影包括3％NaOH、0.5％甲醛。