[發(fā)明專利]一種NOD遺傳背景的動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810065368.4
• 申請(qǐng)日: 2018-01-23
• 公開（公告）號(hào): CN108251456B
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁銀明;張黎琛;盧燎勛;王旭剛;黃蓉;晁天柱;鄭前前;羅靜;谷妍蓉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N15/90
• 分類號(hào): C12N15/90;A01K67/027
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

本發(fā)明涉及一種NOD遺傳背景的動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型的制備方法，屬于基因工程和遺傳修飾技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明首次將NOD遺傳背景小鼠中的ApoE和LDLR基因進(jìn)行同時(shí)敲除，獲得了NOD遺傳背景小鼠的能產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化的基因敲除小鼠模型。本發(fā)明獲得NOD遺傳背景的動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型的主動(dòng)脈有明顯的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成，與傳統(tǒng)經(jīng)典的動(dòng)脈粥樣硬化模型C57B/L6背景ApoE基因敲除小鼠相比，其發(fā)病程度一致，本發(fā)明的方法為研究者提供一種全新的NOD遺傳背景動(dòng)脈粥樣硬化的基因敲除小鼠模型，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的基礎(chǔ)理論研究和臨床診斷治療具有十分重要的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種NOD遺傳背景的動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型的制備方法，屬于基因工程和遺傳修飾技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

動(dòng)脈粥樣硬化是心腦血管疾病發(fā)生的主要原因之一，對(duì)其機(jī)理進(jìn)行深入研究將有助于解決心腦血管疾病治愈困難、死亡率高的難題。NOD小鼠為非肥胖糖尿病品系，30周齡時(shí)糖尿病累計(jì)發(fā)病率雌雄分別為60～80％和20～30％，雌鼠有胰島素依賴性糖尿病，臨床癥狀與人類I型糖尿病相當(dāng)類似，NOD小鼠是I型糖尿病研究和人源化模型建立中使用最為廣泛的小鼠品系，但NOD遺傳背景小鼠基因敲除模型仍極其缺乏，特別是在動(dòng)脈粥樣硬化研究領(lǐng)域。

已經(jīng)有研究結(jié)果表明，NOD遺傳背景小鼠對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化疾病具有很強(qiáng)的抗性(Keren P,George J,Keren G,Harats D:Non-obese diabetic(NOD)mice exhibit anincreased cellular immune response to glycated-LDL but are resistant to highfat diet induced atherosclerosis.Atherosclerosis 2001,157:285-292.)，而且本實(shí)驗(yàn)室已有前期結(jié)果表明，即使在NOD遺傳背景小鼠中單獨(dú)敲除ApoE或者是LDLR基因以后，經(jīng)過高脂飼料喂養(yǎng)，也均不能誘導(dǎo)單基因敲除小鼠發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化疾病，所以在NOD遺傳背景小鼠中獲得能產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化的基因敲除模型，將具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種NOD遺傳背景的動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型的制備方法，該方法可操作性強(qiáng)，構(gòu)建成功率高，為研究動(dòng)脈粥樣硬化和I型糖尿病及其并發(fā)癥提供了很好的小鼠遺傳模型。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種NOD遺傳背景的動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型的制備方法，包括：將NOD小鼠中ApoE基因和LDLR基因共同敲除后，即得。

由于NOD遺傳背景小鼠對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化疾病具有很強(qiáng)的抗性，本發(fā)明為了在NOD遺傳背景小鼠中獲得能產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化的基因敲除小鼠模型，首次將NOD遺傳背景小鼠中的ApoE和LDLR基因進(jìn)行同時(shí)敲除。通過進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明ApoE和LDLR雙基因缺失的小鼠，在經(jīng)過高脂飼料喂養(yǎng)誘導(dǎo)后，小鼠的主動(dòng)脈有明顯的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成，與傳統(tǒng)經(jīng)典的動(dòng)脈粥樣硬化模型C57B/L6背景ApoE基因敲除小鼠相比，其發(fā)病程度一致，表明NOD遺傳背景動(dòng)脈粥樣硬化的基因敲除小鼠模型構(gòu)建成功。本發(fā)明首次在NOD小鼠中實(shí)現(xiàn)ApoE和LDLR雙基因敲除，并獲得可以實(shí)現(xiàn)高脂誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化癥的穩(wěn)定遺傳模型。

在敲除所述ApoE基因時(shí)采用CRISPR/Cas9系統(tǒng)，選擇3個(gè)靶序列，分別如下所示：

ApoE-sgRNA1：5‘-CCTAGCCGAGGGAGAGCCGG AGG-3’；

ApoE-sgRNA2：5‘-GTAATCCCAGAAGCGGTTCA GGG-3’；

ApoE-sgRNA3：5‘-CTTCTGGGATTACCTGCGCT GGG-3’。

在敲除所述LDLR基因時(shí)采用CRISPR/Cas9系統(tǒng)，選擇3個(gè)靶序列，分別如下所示：