[發明專利]一種抗過氧自由基的骨膠原多肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201810064254.8
• 申請日: 2018-01-23
• 公開（公告）號: CN108178794B
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 黃雅欽;丁丁
• 申請（專利權）人: 北京化工大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C12P21/06;C07K1/14;C07K1/18;C07K1/20;C07K1/36;A23L33/18
• 代理公司: 北京怡豐知識產權代理有限公司 11293
• 代理人: 于振強

本發明涉及一種抗過氧自由基的骨膠原多肽及其制備方法，其解決了其解決了現有產品來源單一、存在免疫原性的技術問題，其氨基酸序列如序列表1。本發明同時提供一種抗過氧自由基的骨膠原多肽的制備方法，其以金槍魚骨為原料來提取膠原蛋白，然后采用胰?糜復合酶對其進行酶解，分離純化、冷凍干燥得到抗過氧自由基的骨膠原多肽。本發明可用于抗過氧自由基的骨膠原多肽的制備領域。

技術領域

本發明涉及一種多肽及其制備方法，具體地說是一種抗過氧自由基的骨膠原多肽及其制備方法。

背景技術

生物分子的氧化是一個自由基介導的過程，它會對食品和生物系統造成許多不利的影響。動脈硬化、癌癥等多種疾病相關的有力自由基會不可避免的隨著養代謝的過程而產生。在食品中，食品營養成分的氧化會產生過氧化物，其不僅會影響是食用價值，引起食品品質降低，嚴重的甚至會導致攝入者的身體發生疾病。因此，尋找安全的抗氧化劑一致時生化營養學的研究熱點。雖然人工合成的抗氧化劑相對于天然抗氧化劑相比要便宜很多，但是會對人體產生傷害，因此，我們需要尋找一種安全的天然抗氧化劑。

膠原蛋白是動物體中普遍存在的一種大分子蛋白質，其主要存在于動物的結締組織中。膠原蛋白因其具有良好的生物相容性、生物活性及生物可降解性被廣泛地應用在食品、醫藥、組織工程、化妝品等領域中。膠原水解物是膠原蛋白在一定條件下適度水解而得到的水解物。與膠原蛋白相比，膠原水解物的分子量低、水溶解性較好，易被人體吸收。與此同時，膠原蛋白的水解物也具有了更多的生物活性，如：抗氧化性，延緩衰老，補鈣促進骨骼發育提高免疫力，促進皮膚細胞再生等。

目前的膠原水解物主要來源于豬、牛等動物。但是，這些膠原水解物可能存在免疫原性、宗教信仰等問題。隨著國內水產加工業的發展，水產加工企業產生的下腳料如魚頭、魚皮、魚鱗、魚骨、魚鰭等逐年增長。但是，水產加工下腳料的利用并不充分，造成資源浪費。

發明內容

本發明就是為了解決現有產品來源單一、存在免疫原性的技術問題，提供一種抗氧化性能良好、不存在免疫原性的抗過氧自由基的骨膠原多肽及的制備方法。

為此，本發明提供一種抗過氧自由基的骨膠原多肽，其氨基酸序列如序列表1所示，所述抗過氧自由基的骨膠原多肽的多肽鏈的C端為苯丙氨酸殘基。

本發明同時提供一種抗過氧自由基的骨膠原多肽的制備方法，其以金槍魚骨為原料來提取膠原蛋白，然后采用胰-糜復合酶對其進行酶解，分離純化、冷凍干燥得到抗過氧自由基的骨膠原多肽。

優選的，酶解條件為：pH為8，溫度37℃，酶解時間為2h，胰蛋白酶的質量濃度為0.5％，糜蛋白酶的質量濃度為0.1％。

優選的，分離純化手段包括DEAE-52纖維素離子交換色譜，RP-HPLC反相高效液相色譜。

優選的，純化步驟為：(1)酶解產物用DEAE-52纖維素陰離子交換色譜進行分離，上樣后洗去未吸附組分，再以pH 7.2磷酸緩沖液進行以0.1，0.5，1.0mol/L的NaCl溶液進行洗脫，流速為1.0mL/min，在280nm下進行測量，測定各吸收峰對應的洗脫組分的抗氧化活性；(2)收集具有最佳抗氧化活性的峰，再利用RP-HPLC反相高效液相色譜進一步分離，所用的色譜柱為Zorbax SB-C18，上樣量為20μL，流速為1.0mL/min，檢測波長為280nm，洗脫液自含體積比2％乙腈和98％水的混合液開始，至體積比為98％乙腈和2％水，進行梯度洗脫；收集在27.6min處的洗脫峰，即得到抗過氧自由基的骨膠原多肽。然后利用MS/MS鑒定多肽的氨基酸序列。

本發明同時提供一種抗過氧自由基的骨膠原多肽在清除過氧自由基中的應用。

優選的，本發明提供的抗過氧自由基的骨膠原多肽在清除過氧自由基中的應用，抗氧化骨膠原多肽清除過氧自由基的半抑制濃度IC₅₀值為4.025mM。