[發明專利]人組蛋白H3 Ser10和Ser28在鑒定人早期胚胎的發育分期中的應用

有效

• 申請號: 201810064065.0
• 申請日: 2018-01-23
• 公開（公告）號: CN108344868B
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 陳磊;馬寧趙
• 申請（專利權）人: 鄭州大學第一附屬醫院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

本發明涉及一種檢測人H3Ser10和H3Ser28磷酸化狀態產品的新用途。H3Ser10的磷酸化狀態可用于鑒定或輔助鑒定人胚胎中雄原核數量、人胚胎發育時期、人卵母細胞的生長時期、或篩選人胚胎或人卵子；H3Ser28的磷酸化狀態可用于鑒定或輔助鑒定人胚胎發育時期、人卵母細胞的生長時期、或篩選人胚胎或人卵子。

技術領域

本發明涉及人類輔助生殖技術領域，尤其涉及人組蛋白H3 Ser10(第10位絲氨酸)和Ser28(第28位絲氨酸)在鑒定人早期胚胎的發育分期中的應用。

背景技術

表觀遺傳學是遺傳學的一門分支學科，它是研究在非DNA序列變化的前提下，引起的可以傳給下一代的基因表達變化。它的研究范疇包括DNA甲基化(DNA methylation)，組蛋白翻譯后修飾(post translational modifications,PTMs)，基因組印記(genomicimprinting)，RNA編輯(RNA editing)，基因沉默(gene silencing)，母體效應(maternaleffects)和休眠轉座子激活等。表觀遺傳學不僅與維持細胞正常增值與凋亡有關，而且與胚胎發育、細胞惡性轉變密切相關。在生殖細胞的生長及受精后的胚胎發育過程中，每一步都要有精確而復雜的表觀遺傳修飾變化。

在遺傳表觀修飾中，組蛋白翻譯后修飾是較為普遍的一種修飾方式。它包含了組蛋白的磷酸化、乙酰化、甲基化、ADP核糖基及化泛素化等。其中，組蛋白磷酸化是組蛋白N-端氨基酸殘基的磷酸化修飾過程，組蛋白H3的磷酸化的主要位點是第10位絲氨酸(Ser10)、第28位絲氨酸(Ser28)、第3位蘇氨酸(Thr3)以及第11位蘇氨酸上(Thr11)。在哺乳動物組蛋白磷酸當中，最具有代表意義的就是組蛋白H3 Ser10(H3第10位絲氨酸)和H3 Ser28(第28位絲氨酸)的磷酸化，隨著卵母細胞的減數分裂成熟，H3Ser10磷酸化和H3Ser28磷酸化的分布與表達也發生著變化。

王強等人在小鼠中關于H3Ser10以及H3Ser28的研究表明，在生發泡(GV)期卵母細胞中，H3Ser10磷酸化有明顯的信號并與DNA共定位，減數分裂恢復后，H3Ser10磷酸化的信號遍布在整個染色體上，但在第一次減數分裂中期著絲粒周圍的異染色質中信號最強；但Swain等人的研究表明，在小鼠GV期未發現磷酸化的H3Ser10。在對豬卵母細胞成熟過程的研究發現，H3Ser10在GV期磷酸化的信號較弱，隨著生發泡破裂，H3Ser10磷酸化的信號逐漸增強，從前中期到第二次分裂中期一直分布于整個染色體上；H3Ser28磷酸化信號在GV期時比較弱，從Pre-MI到MII一直環繞于染色體周圍，后期消失。對于兔卵母細胞組蛋白磷酸化的研究表明，H3Ser10磷酸化發生于生發泡破裂期，并且在生發泡破裂期達到頂峰，在第一次減數分裂中發生部分的去磷酸化，磷酸化信號變弱，但在第二次減數分裂時磷酸化水平又再次慢慢升高。

從現有報道可以看出，組蛋白H3的磷酸化在卵母細胞成熟過程中具有代表性，但是，在不同物種之間的磷酸化模式并不相同，尤其是針對同一物種(小鼠)也有不同的研究結果，尤其是目前還沒有對于人類卵母細胞成熟過程中組蛋白H3磷酸化狀態的報道。

本發明采用特異性抗體和免疫熒光技術，探究了人卵母細胞成熟過程及早期胚胎發育過程中的組蛋白H3磷酸化進程，填補了人類輔助生殖生育技術相關的基礎研究空白。

發明內容

本文中的人組蛋白H3 Ser10是指人組蛋白H3的第10位絲氨酸，Ser28是指第28位絲氨酸，如無特殊說明，本文中的H3Ser10即指人組蛋白H3第10位絲氨酸，H3Ser28即指人組蛋白H3第28位絲氨酸。

本發明一方面提供了檢測人組蛋白H3 Ser10和Ser28的磷酸化的產品，所述產品優選抗人組蛋白H3 Ser10和Ser28磷酸化的抗體，優選單克隆抗體。