[發(fā)明專利]一種抗氧化骨膠原多肽及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810063503.1
• 申請(qǐng)日: 2018-01-23
• 公開（公告）號(hào): CN108250291B
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃雅欽;丁丁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京化工大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/78
• 分類號(hào): C07K14/78;C12P21/06;C07K1/14;C07K1/18;C07K1/20;C07K1/36;A23L3/3535
• 代理公司: 北京怡豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11293
• 代理人: 于振強(qiáng)

本發(fā)明涉及一種抗氧化骨膠原多肽及其制備方法，其解決了現(xiàn)有產(chǎn)品來源單一、存在免疫原性的技術(shù)問題，其氨基酸序列如序列表1。本發(fā)明同時(shí)提供一種抗氧化骨膠原多肽的制備方法，其以金槍魚骨為原料來提取膠原蛋白，然后采用胰?糜復(fù)合酶對(duì)其進(jìn)行酶解，分離純化、冷凍干燥得到抗氧化骨膠原多肽。本發(fā)明可用于抗氧化多肽的制備領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種多肽及其制備方法，具體地說是一種抗氧化骨膠原多肽及其制備方法。

背景技術(shù)

生物分子的氧化是一個(gè)自由基介導(dǎo)的過程，它會(huì)對(duì)食品和生物系統(tǒng)造成許多不利的影響。動(dòng)脈硬化、癌癥等多種疾病相關(guān)的有力自由基會(huì)不可避免的隨著養(yǎng)代謝的過程而產(chǎn)生。在食品中，食品營養(yǎng)成分的氧化會(huì)產(chǎn)生過氧化物，其不僅會(huì)影響是食用價(jià)值，引起食品品質(zhì)降低，嚴(yán)重的甚至?xí)?dǎo)致攝入者的身體發(fā)生疾病。因此，尋找安全的抗氧化劑一致時(shí)生化營養(yǎng)學(xué)的研究熱點(diǎn)。雖然人工合成的抗氧化劑相對(duì)于天然抗氧化劑相比要便宜很多，但是會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生傷害，因此，需要尋找一種安全的天然抗氧化劑。

膠原蛋白是動(dòng)物體中普遍存在的一種大分子蛋白質(zhì)，其主要存在于動(dòng)物的結(jié)締組織中。膠原蛋白因其具有良好的生物相容性、生物活性及生物可降解性被廣泛地應(yīng)用在食品、醫(yī)藥、組織工程、化妝品等領(lǐng)域中。膠原水解物是膠原蛋白在一定條件下適度水解而得到的水解物。與膠原蛋白相比，膠原水解物的分子量低、水溶解性較好，易被人體吸收。與此同時(shí)，膠原蛋白的水解物也具有了更多的生物活性，如：抗氧化性，延緩衰老，補(bǔ)鈣促進(jìn)骨骼發(fā)育提高免疫力，促進(jìn)皮膚細(xì)胞再生等。

目前的膠原水解物主要來源于豬、牛等動(dòng)物。但是，這些膠原水解物可能存在免疫原性、宗教信仰等問題。隨著國內(nèi)水產(chǎn)加工業(yè)的發(fā)展，水產(chǎn)加工企業(yè)產(chǎn)生的下腳料如魚頭、魚皮、魚鱗、魚骨、魚鰭等逐年增長。但是，水產(chǎn)加工下腳料的利用并不充分，造成資源浪費(fèi)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明就是為了解決現(xiàn)有產(chǎn)品來源單一、存在免疫原性的技術(shù)問題，提供一種抗氧化性能良好、不存在免疫原性的抗氧化骨膠原多肽及的制備方法。

為此，本發(fā)明提供一種抗氧化骨膠原多肽，其氨基酸序列如序列表1所示，所述抗氧化骨膠原多肽肽鏈含有兩個(gè)蛋氨酸殘基。

本發(fā)明提供一種抗氧化骨膠原多肽的制備方法，其以金槍魚骨為原料來提取膠原蛋白，然后采用胰-糜復(fù)合酶對(duì)其進(jìn)行酶解，分離純化、冷凍干燥得到抗氧化骨膠原多肽。

優(yōu)選的，酶解條件為：pH為8，溫度37℃，酶解時(shí)間為2h，胰蛋白酶的質(zhì)量濃度為0.5％，糜蛋白酶質(zhì)量濃度為0.1％。

優(yōu)選的，分離純化手段包括DEAE-52纖維素離子交換色譜，RP-HPLC反相高效液相色譜。

優(yōu)選的，純化步驟為：(1)酶解產(chǎn)物用DEAE-52纖維素陰離子交換色譜進(jìn)行分離，上樣后洗去未吸附組分，再以pH 7.2磷酸緩沖液進(jìn)行以0.1，0.5，1.0mol/L的NaCl溶液進(jìn)行洗脫，流速為1.0mL/min，在280nm下進(jìn)行測(cè)量，測(cè)定各吸收峰對(duì)應(yīng)的洗脫組分的抗氧化活性；(2)收集具有最佳抗氧化活性的峰，再利用RP-HPLC反相高效液相色譜進(jìn)一步分離，所用的色譜柱為Zorbax SB-C18，上樣量為20μL，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長為280nm，洗脫液自含體積比2％乙腈和98％水的混合液開始，至體積比為98％乙腈和2％水，進(jìn)行梯度洗脫；收集在27.6min處的洗脫峰，即得到抗氧化骨膠原多肽。然后利用MS/MS鑒定多肽的氨基酸序列。

本發(fā)明同時(shí)提供一種抗氧化骨膠原多肽在清除DPPH自由基中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，本發(fā)明提供的抗氧化骨膠原多肽在清除DPPH自由基中的應(yīng)用，抗氧化骨膠原多肽半抑制濃度IC₅₀為3.149mM。