[發明專利]一種基于硅基多肽的生物納米磁珠制備及其應用

有效

• 申請號: 201810060816.1
• 申請日: 2018-01-22
• 公開（公告）號: CN108165545B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 張金菊;王紅光
• 申請（專利權）人: 北京國科融智生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;H01F1/00
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 王玉松

1.一種基于硅基多肽的生物納米磁珠的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S10，構建細菌磁顆粒膜蛋白基因mamC或mamF的缺失突變體菌株，即一級重組菌株；

S20，構建硅基多肽和細菌磁顆粒膜蛋白MamC或者MamF的基因融合表達載體；得到的表達載體導入到一級重組菌株中，篩選表達展示硅基多肽的二級重組菌株；

S30，通過對二級重組菌株的培養發酵，生產表達展示硅基多肽的生物納米磁珠；

S40，以展示硅基多肽的生物納米磁珠作為種子原料，在生物納米磁珠表面進行硅基化修飾和氧化硅沉淀，得到硅沉積或硅基化修飾的生物納米磁珠；

所述硅基多肽為silaffins多肽；

所述silaffins多肽為YR-SiP1、YR-SiP2、YR-SiP3中的一種；

YR-SiP1的序列為：GAGAGSGAGA GSKKKKRHKK KKRHKKKKRH KKKKK；

YR-SiP2的序列為：GAGAGSGAGA GSEEEETAEE EEDAEEEEDE AKEEEEEEEE；

YR-SiP3的序列為：GAGAGSGAGA GSGAGAGSSS KKSGSYSGSK GSKRRILGAG AGSSSKKSGSYSGSKGSKRRIL。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述YR-SiP1、YR-SiP2或YR-SiP3的基因序列如下：

YR-SiP1：5’-GGTGCCGGTG CTGGTTCAGG TGCTGGTGCT GGTTCAAAGA AGAAGAAGCGGCACAAGAAG AAGAAGCGGC ACAAGAAAAA GAAGCGGCAC AAGAAGAAGA AGAAA-3’、YR-SiP2：5’-GGTGCCGGTG CTGGTTCAGG TGCTGGTGCT GGTTCAGAGG AGGAAGAAAC TGCAGAGGAA GAAGAAGATGCAGAGGAAGA AGAGGACGAG GAAGCTAAGG AGGAGGAGGA AGAGGAAGAA GAA-3’、

YR-SiP3：5’-GGTGCCGGTG CTGGTTCAGG TGCTGGTGCT GGTTCAGGTG CTGGTGCTGGTTCATCCTCT AAGAAAAGCG GCAGTTACAG CGGCTCTAAG GGCAGTAAAA GGAGGATCCT GGGTGCTGGTGCTGGTTCAT CCTCTAAGAA AAGCGGCAGT TACAGCGGCT CTAAGGGCAG TAAAAGGAGG ATCCTG-3’中的一種。

3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述S10步驟包括：

設計兩對引物分別擴增mamC或mamF基因兩側約500bp的同源DNA片段，通過分子克隆構建一條基于噬菌體病毒的微載體序列AAV-del-mamC或AAV-del-mamF；

AAV-del-mamC或AAV-del-mamF通過質粒提取及酶切步驟得到足夠量的核酸序列產物，調節濃度為2mg/mL，通過電轉化的方式同時轉入MSR-I野生型菌株中，電轉化方案：方波電脈沖，電壓3100V-3200V，電脈沖時間是3.1-3.3ms，電脈沖次數是1-2次；

電轉化后菌株通過蔗糖和抗生素慶大霉素梯度濃度壓力篩選雙交換突變菌株，經測序技術驗證后，獲得mamC或mamF缺失突變的重組菌株，即一級重組菌株MSRI-dC或MSRI-dF。