[發(fā)明專利]紅麻干旱響應(yīng)基因EST-SSR引物及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810056728.4
• 申請(qǐng)日: 2018-01-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108048596B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 安霞;金關(guān)榮;王斌;吳文嬙;駱霞虹;陳常理;李文略;李蘋芳;朱關(guān)林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省蕭山棉麻研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

本發(fā)明公開(kāi)了一種紅麻干旱響應(yīng)基因EST?SSR引物及試劑盒。所述引物共有11對(duì)，其中的一對(duì)或者多對(duì)作為EST?SSR多態(tài)性標(biāo)記用于鑒定紅麻親緣關(guān)系、遺傳多樣性或者抗旱相關(guān)基因特定外顯子區(qū)簡(jiǎn)單重復(fù)序列多態(tài)性差異。本發(fā)明為紅麻分子標(biāo)記輔助育種提供良好的標(biāo)記儲(chǔ)備，也為在紅麻自然變異中篩選關(guān)鍵基因的功能等位變異提供一種檢測(cè)的候選分子標(biāo)記。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及EST-SSR標(biāo)記，具體而言，是紅麻干旱響應(yīng)基因EST-SSR引物及試劑盒，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

紅麻（Hibiscus cannabinus L.）是錦葵科木槿屬的一年生重要的韌皮纖維作物,主要用于紡織，也用于制作紙漿、生物質(zhì)能源、建材等方面。因此，大力發(fā)展麻類作物尤其是紅麻是滿足人們對(duì)天然纖維不斷增加的需求量的重要途徑之一。紅麻生長(zhǎng)適應(yīng)性強(qiáng)，尤其是抗旱能力強(qiáng)，能在山坡丘陵地區(qū)種植，不與糧食爭(zhēng)地。隨著全球氣候惡性變化和水資源日益短缺，選育抗旱性較強(qiáng)的紅麻品種也顯得越來(lái)越重要。

EST-SSR標(biāo)記是對(duì)表達(dá)序列標(biāo)簽 (expressed sequence tag, EST) 中的簡(jiǎn)單重復(fù)序列 (simple sequence repeat, SSR) 進(jìn)行開(kāi)發(fā)的一種新型分子標(biāo)記，與其他的分子標(biāo)記相比，EST-SSR標(biāo)記具有高效、成本低等優(yōu)點(diǎn)，可用于種質(zhì)資源遺傳多樣性分析、親緣關(guān)系鑒定以及分子輔助育種工作中。此外，有目的性地針對(duì)某一類基因開(kāi)發(fā)EST-SSR標(biāo)記，可以對(duì)種質(zhì)資源特定性狀相關(guān)的基因外顯子區(qū)功能性變異的多態(tài)性差異進(jìn)行分析，反映種質(zhì)資源在這些基因特定區(qū)段的差異，可更方便快捷地定位和克隆相關(guān)性狀功能基因。

目前，已相繼在黃瓜、小麥、水稻、花生、棉花等物種中開(kāi)展了EST-SSR標(biāo)記研究。與這些物種相比，紅麻EST-SSR標(biāo)記開(kāi)發(fā)滯后，NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中注冊(cè)的紅麻核苷酸序列僅423條（截至2018年1月3日）。紅麻的分子標(biāo)記目前主要為隨機(jī)標(biāo)記，如RAPD、ISSR和SRAP等，有針對(duì)性的分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)較少，相對(duì)信息量較少且缺乏可以參考的基因組圖譜信息，嚴(yán)重限制了紅麻的遺傳改良。例如，鄭海燕等以來(lái)源于不同國(guó)家和地區(qū)的51份紅麻野生種、近緣種和栽培種為材料, 利用ISSR和RAPD標(biāo)記構(gòu)建紅麻種質(zhì)資源分子身份證；劉倩等以來(lái)源于不同國(guó)家和地區(qū)的127份紅麻栽培種、野生種和近緣種為材料，利用SRAP標(biāo)記構(gòu)建紅麻種質(zhì)資源分子身份證；徐偉等利用RAPD分子標(biāo)記對(duì)紅麻12個(gè)野生種、7個(gè)常規(guī)栽培種和5個(gè)近緣種進(jìn)行了親緣關(guān)系研究；萬(wàn)雪貝等開(kāi)發(fā)的85個(gè)轉(zhuǎn)錄因子EST-SSR標(biāo)記在至少2個(gè)紅麻材料之間存在多態(tài)性。而分子標(biāo)記的數(shù)量和質(zhì)量影響著種質(zhì)源遺傳多樣性分析的準(zhǔn)確性，現(xiàn)有的紅麻SSR分子標(biāo)記遠(yuǎn)不能滿足需求。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種紅麻干旱響應(yīng)基因EST-SSR引物及試劑盒。

一種紅麻干旱響應(yīng)基因EST-SSR引物，所述引物共有11對(duì)，其中的一對(duì)或者多對(duì)作為EST-SSR多態(tài)性標(biāo)記用于鑒定紅麻親緣關(guān)系、遺傳多樣性或者抗旱相關(guān)基因特定外顯子區(qū)簡(jiǎn)單重復(fù)序列多態(tài)性差異；所述引物，分別為 ：

第1對(duì)引物，其序列如 SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；

第2對(duì)引物，其序列如 SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：2所示；

第3對(duì)引物，其序列如 SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示；

第4對(duì)引物，其序列如 SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7所示；

第5對(duì)引物，其序列如 SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示；

第6對(duì)引物，其序列如 SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11所示；

第7對(duì)引物，其序列如 SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示；