[發明專利]一種黑腹果蠅RasV12

有效

• 申請號: 201810055291.2
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108184770B
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 吳晨曦;江春花;高秀娟;喇孝瑾;白素芬
• 申請（專利權）人: 華北理工大學
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 李明

本發明公開一種黑腹果蠅Ras^V12;Snail腫瘤遷徙模型的建立方法，采用特定的果蠅品系進行雜交后培養并篩選獲得黑腹果蠅Ras^V12;Snail腫瘤遷徙模型；本發明方法構建的黑腹果蠅Ras^V12;Snail腫瘤遷徙模型，研究者可利用此模型進行大規模的遺傳篩選，尋找抑制腫瘤遷移的基因突變或RNAi，闡明其調控腫瘤遷移的分子機制，并在哺乳動物細胞中對其同源物進行功能驗證，以期為癌癥的臨床治療提供新的藥物靶點和治療方案。

技術領域

本發明屬于生物遺傳學技術領域，具體涉及一種黑腹果蠅Ras^V12;Snail腫瘤遷徙模型的建立方法。

背景技術

果蠅遺傳學操作系統，有Gal4/UAS雙表達系統和FLP/FRT系統。其中，（一）Gal4/UAS雙表達系統：Gal4/UAS系統是果蠅中最為常用的轉基因技術體系，可以讓外源基因或RNAi在特定細胞或組織選擇性表達。半乳糖調節上游啟動子元件（galactose-regulatedupstream promoter element 4），縮寫Gal4，是酵母中類似于原核生物乳糖操縱子的一個轉錄激活子。上游激活序列UAS（upstream activate sequense），是酵母中另一種類似高等真核生物增強子的序列。Gal4通過與UAS相結合，調節與半乳糖代謝相關基因的表達。1993年，科學家將目的基因X連接在UAS之后，通過轉基因技術建立UAS-X果蠅品系，然后與特定的Gal4果蠅品系雜交，在后代中就可以得到同時具有Y-Gal4和UAS-X的果蠅，從而實現特異性的在Y組織表達X基因（參考文獻1，Brand A. H. and Perrimon N., Targeted geneexpression as a means of altering cell fates and generating dominantphenotypes. Development, 1993, 118: 401-15）。因為果蠅基因組不編碼Gal4轉錄因子，所以在果蠅體內過量表達Gal4，不會對果蠅的發育產生顯著的影響。同樣，在果蠅體內插入UAS調控序列，也不會對果蠅產生影響。這個系統的建立為利用果蠅作為研究模型的科學家在實驗設計上提供了有利、便捷、高效的遺傳操作工具。Gal4/UAS雙表達系統示意圖如圖1所示。

（二）FLP/FRT系統：FLP是酵母中的一種重組酶，它可以識別兩個700bp的同源靶位點FRT (FLP recombination targets，FRTs)，如果兩個FRT片段位于果蠅一對同源染色體的相同位點，熱擊誘導的FLP表達可以介導這兩個位點進行有絲分裂重組，產生重組遠端純合的子細胞 (圖2)（參考文獻2，Zhang S. P. and Xue L., [Progress on cell lineageanalysis in Drosophila melanogaster]. Yi Chuan, 2012, 34: 819-28）。研究發現FRT介導的有絲分裂重組效率遠高于其他方式，重組發生的位點也可以人為控制。此外，熱擊對細胞的傷害也較小。因此，研究者可以通過FLP/FRT技術探究少量基因改變的細胞在野生型細胞環境下的生長情況，從而進一步研究細胞競爭的分子機制。FLP/FRT系統作用原理示意圖如圖2所示。