[發明專利]一種基于病原相關分子模式蛋白鑒定具有分泌功能信號肽的方法

有效

• 申請號: 201810055204.3
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108300733B
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發明（設計）人: 陰偉曉;羅朝喜;謝松霖;林楊
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種基于病原相關分子模式蛋白鑒定具有分泌功能信號肽的方法，其特征在于，

利用分泌蛋白XEG1在植物細胞外引起細胞死亡的特點，將待檢測信號肽和XEG1去信號肽部分融合，在植物細胞中表達并觀察是否引起壞死，從而快速高效的檢測信號肽是否具有分泌功能；

該方法包括以下步驟：

(1)將待鑒定信號肽與病原相關分子模式蛋白無信號肽的C端融合，構建表達載體；

所述病原相關分子模式蛋白為大豆疫霉XEG1，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述表達載體為植物瞬時表達載體；

(2)將步驟(1)構建的表達載體轉化感受態細胞，所述感受態細胞為農桿菌感受態；

(3)將步驟(2)的感受態細胞注射入植物細胞中，觀察注射位點壞死情況，若注射位點植物細胞壞死，則待檢測信號肽具有分泌功能，若注射位點植物細胞無壞死，則待檢測信號肽不具有分泌功能。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述植物為煙草、馬鈴薯、番茄、辣椒。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括設立陽性對照，所述陽性對照是在步驟(1)階段，將大豆疫霉無毒效應蛋白Avr1b的信號肽連接病原相關分子模式蛋白無信號肽的C端構建表達載體得到。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，陽性對照為將氨基酸序列如SEQ ID NO.3所述的Avr1b的信號肽連接氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示大豆疫霉XEG1的無信號肽的C端構建植物瞬時表達載體得到。

5.權利要求1-4任一所述的方法在篩選具有分泌功能信號肽中的應用。

6.權利要求1-4任一所述的方法在制備轉基因植物中的應用。