[發明專利]一種生物樣品的檢測方法

在審

• 申請號: 201810054402.8
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108426997A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 蘇慶寧;祝勝郎
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 北京博華智恒知識產權代理事務所(普通合伙) 11431
• 代理人: 樊衛民;譚彥聞

本發明提供了一種生物樣品的檢測方法，包括以下步驟：(1)對采集自受試者的生物樣品進行分離，得到待測樣品；和(2)在所述待測樣品中檢測免疫球蛋白IgA，檢測結果作為判斷所述受試者是否需要進行腎活檢的初步依據。本發明提供的檢測方法可以對IgA腎病進行初級篩查，為后期是否進行腎活檢穿刺提供參考數據；而且該檢測方法是非侵入性的，操作簡便且檢測費用相對較低。

技術領域

本發明涉及醫學檢驗領域，具體涉及一種生物樣品的檢測方法。

背景技術

IgA腎病是最為常見的一種原發性腎小球疾病，是指腎小球系膜區以IgA或IgA沉積為主，伴或不伴有其他免疫球蛋白在腎小球系膜區沉積的原發性腎小球病。病變類型包括局灶節段性病變、毛細血管內增生性病變、系膜增生性病變、新月體病變及硬化性病變等。其臨床表現為反復發作性肉眼血尿或鏡下血尿，可伴有不同程度蛋白尿，部分患者可以出現嚴重高血壓或者腎功能不全。

IgA腎病分為原發性IgA腎病和繼發性IgA腎病兩種類型。其中，原發性IgA腎病由腎臟本身疾病引起。繼發性IgA腎病由腎臟以外的疾病引起，如紫癜性腎炎、HIV感染、血清陰性脊柱關節炎、腫瘤、麻風病、肝臟疾病、家族性IgA腎病等。

目前臨床常用的IgA腎病檢測和診斷方法是直接進行腎臟活檢，即腎穿刺檢查。然而，腎穿刺檢查是一項較為復雜的、技術含量較高的檢查方法，一般需要在三級以上醫院及其相關檢測機構配合進行，普及性較差。另外，腎穿刺是一種侵入性檢測手段，檢測存在風險，受試者遭受身體上的痛苦的同時還有可能引發內出血。而且，受試者需要住院過夜以完成檢查，因而難以成為慢性疾病治療過程中明確療效和預后所需的多次重復性檢查手段。另外進行腎穿刺的費用也較高。在中國目前醫療資源較為匱乏的背景下，受試者不得不等待數天甚至更長的時間才能被安排進行此項檢查。

另外，若腎臟活檢的結果是患者并未患有腎病，則患者在白白遭受穿刺帶來的身體痛苦和承擔高額花費的同時，還可能經歷內出血的風險，對身體造成二次傷害。這對患者、家屬、醫院三方都是潛在的負擔。因此，對疑似患有腎臟疾病的患者在進行腎穿刺之前進行前期、無創(非侵入性)、低費用、快速的可靠排查是有利的。

基于現有技術的上述缺陷，亟需開發出一種針對IgA腎病的高效、簡單、非侵入的檢測方法。

發明內容

本發明人發現，IgA腎病患者尿液離心沉渣分離的免疫球蛋白IgA和/或含有IgA的免疫復合物檢測呈陽性，并且二者的存在及分布情況與IgA腎病的嚴重程度相關。本發明人據此發明出一種針對IgA腎病相關標志物的無創檢測方法，該檢測結果作為判斷所述受試者是否需要進行腎活檢的初步依據。本發明提供的檢測方法可以作為現有腎活檢方法的前期或輔助手段和/或為腎活檢提供參考數據。當然，在結合或不結合其他因素的前提下，若臨床醫生認為本發明檢測方法的結果足以確定受試者患有IgA腎病或受試者基于此方法或用途的結果即確信其患有腎病，也可直接進行治療或留待觀察。

根據本發明，提供一種生物樣品的檢測方法，包括以下步驟：

(1)對采集自受試者的生物樣品進行分離，得到待測樣品；和

(2)在所述待測樣品中檢測免疫球蛋白IgA，檢測結果作為判斷所述受試者是否需要進行腎活檢的初步依據。

其中，所述生物樣品是尿液，所述待測樣品是尿液經過離心處理得到的尿液沉淀物，所述待測樣品包含以下中的一種或多種：細胞、細胞碎片、以及附著在細胞或細胞碎片上的免疫復合物。

其中，步驟(2)中通過免疫熒光檢測在所述待測樣品中檢測IgA。

所述免疫熒光檢測按照以下步驟進行：

(A)將所述免疫組合物作為一抗與所述采集自受試者的生物樣品接觸，形成抗體-抗原復合物，洗滌除去未結合的一抗；

(B)加入熒光標記的二抗進行染色，洗滌除去未結合的二抗；