[發明專利]基于探針導向的重組酶介導的等溫擴增法檢測SNP位點用探針和試劑盒

有效

• 申請號: 201810054152.8
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108060213B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 馬學軍;段素霞;王佶;張益;申辛欣;何小周
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種基于探針導向的重組酶介導的等溫擴增法檢測SNP位點的探針和上游引物組合，所述探針和上游引物組合由一條上游引物和一條探針組成；所述探針的長度為46~52nt，其中SNP位點后一位堿基或SNP位點互補堿基的后一位堿基被四氫呋喃替代，探針的5’端距四氫呋喃位點至少間隔30個堿基，3’端距四氫呋喃位點至少間隔15個堿基；所述探針修飾有熒光基團和猝滅基團，所述熒光基團修飾在四氫呋喃位點3’端的T堿基上，所述猝滅基團修飾在SNP位點的5’端T堿基上或SNP位點互補堿基的5’端T堿基上；熒光基團修飾的T堿基與猝滅基團修飾的T堿基間隔2~5個堿基。

2.根據權利要求1所述的探針和上游引物組合，其特征在于，所述探針的熒光基團修飾在四氫呋喃位點的下一位T堿基上。

3.根據權利要求1所述的探針和上游引物組合，其特征在于，所述探針的猝滅基團修飾SNP位點的上一位T堿基上或SNP位點互補堿基的上一位T堿基上。

4.根據權利要求1所述的探針和上游引物組合，其特征在于，所述探針的熒光基團包括6-羧基熒光素或六氯-6-甲基熒光素；所述猝滅基團包括黑洞猝滅基團。

5.根據權利要求1所述的探針和上游引物組合，其特征在于，所述探針的3’末端堿基由磷酸鹽阻滯劑修飾。

6.根據權利要求1~5任意一項所述的探針和上游引物組合，其特征在于，所述SNP位點為A或C；所述SNP位點互補堿基為T或G。

7.根據權利要求1~5任意一項所述的探針和上游引物組合，其特征在于，當檢測SNP位點為MTHFR A1298C 側翼序列時，所述探針包括兩條，分別具有如序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列和具有如序列表中SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

8.一種基于探針導向的重組酶介導的等溫擴增法檢測SNP位點的試劑盒，由以下成分組成：權利要求1~7任意一項所述的探針和上游引物組合、酶混合物、反應緩存液、280mmol/L醋酸鎂；所述酶混合物包括800ng/μL 單鏈結合蛋白，60ng/μL 噬菌體UvsX蛋白，50ng/μL DNA 聚合酶和40ng/μL外切酶III。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述上游引物具有如序列表中SEQ IDNo.3所示的核苷酸序列。