[發明專利]一種治療柑橘黃龍病的多粘類芽孢桿菌培養液復合藥物及其制備方法

有效

• 申請號: 201810053675.0
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108294049B
• 公開（公告）日: 2019-07-19
• 發明（設計）人: 熊大維;金丹鳳;黃國昌;顧斌濤;李鵬;黃筱萍;劉蘭
• 申請（專利權）人: 江西省科學院微生物研究所;江西綠悅生物工程股份有限公司
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P1/00;C12N1/20;C12R1/12
• 代理公司: 南昌智旭知識產權代理事務所(普通合伙) 36138
• 代理人: 周超

本發明涉及一種以多粘類芽孢桿菌培養液為主要成分的柑橘黃龍病治療藥物，其組成為多粘類芽孢桿菌培養液10％、苯乳酸0.02％、MS培養基50％、水39.98％、pH為6.0。多粘類芽孢桿菌培養液配方為豆粕10克/升、微晶纖維素5克/升、硫酸鎂0.1克/升、硫酸錳0.1克/升、pH＝7.0，培養條件為28℃、搖床轉速220轉/分鐘、培養48小時。本發明采用微晶纖維素作為唯一培養碳源，誘導了β?葡聚糖酶的生物合成，培養液中其酶活達到了261IU/mL，以該培養液為主，苯乳酸和MS為輔的藥物對柑橘進行治療，熒光定量PCR檢測結果表明顯著減少柑橘黃龍病病菌在病株中的含量以及黃龍病的康復。

技術領域

本發明涉及一種以多粘類芽孢桿菌培養液為主要成分的柑橘黃龍病治療藥 物，屬于生物技術領域。

背景技術

柑橘黃龍病是一種柑橘類植物的毀滅性病害，目前還沒有效的抑制藥劑。該 病害的致病菌是一種迄今尚不能人工培養的韌皮部桿菌屬細菌 (Candidatus Liberibacter)。

該病害防治的難點在于，致病菌無法獲得人工培養，因為缺少該病害的目標 菌，故無法篩選出針對性的殺菌藥劑。

目前對該病害的防治均使用一種或幾種復配的抗生素類的殺菌藥劑，此類藥 劑具有廣譜殺菌性，對植物和環境生態破壞嚴重，目前實際使用中效果不理想。

植物內生菌在高等植物中普遍存在。由于植物內生菌和植物存在著共生關 系，因此有關植物內生菌的研究正成為國內外環境、生物防治等領域的熱點。雖 然柑橘黃龍病菌無法培養，但是可以找到其伴生菌，以黃龍病菌的伴生菌為篩選 抑菌藥物的指示菌，此種方法可以有目的性的篩選出有效的抑菌藥劑。

通過該方法篩選出的抑菌劑存在專有性，通過殺滅黃龍病菌的伴生菌改變了 植物微生態壞境，而植物微生態壞境的改變可以抑制黃龍病菌的生長、繁殖，從 而達到殺滅該病菌的目的。

發明內容

本發明的目的在于提供一種以多粘類芽孢桿菌培養液為主要成分的柑橘黃 龍病治療藥物，通過殺滅黃龍病菌的伴生菌來抑制黃龍病菌的生長、繁殖。

本發明采用的技術方案為：

一種柑橘黃龍病治療藥物，其制備方法為：首先制備多粘類芽孢桿菌培養液， 其培養基成分為豆粕10克/升、微晶纖維素5克/升、硫酸鎂0.1克/升、硫酸錳 0.1克/升、pH＝7.0，接種1毫升多粘類芽孢桿菌菌種至200毫升上述培養基，培 養條件為28℃、搖床轉速220轉/分鐘、培養48小時。培養48小時后，采用20000g 的離心力對培養液離心，取離心上清100克、加入0.2克苯乳酸、加入500毫升 MS培養基、用去離子水調配至1000mL并調節pH為6.0，混勻，即可。所述柑 橘黃龍病治療藥物采用樹干輸液的方法施藥。

本發明以黃龍病菌的伴生菌為指示菌篩選出以富含β-葡聚糖酶的多粘類芽 孢桿菌培養液為主的藥劑，苯乳酸和MS培養基為輔助成分，在無法獲得人工培 養致病菌的情況下，這是柑橘黃龍病害防治的一條有效途徑。

苯乳酸作為一種發酵有機酸，存在于天然蜂蜜中，是一種新型的小分子抗菌 物質，對抑制霉菌、腐敗菌上有相關的研究，主要用在食物保鮮。對于果樹內生 菌的抑菌研究未見報導，對本專利中涉及的細桿菌屬(Microbacterium)、代爾 夫特菌屬(Delftia)，不動桿菌屬(Acinetobacter)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、 伯克霍爾德菌屬(Burkholderia)，5個菌株未見相關的抑菌研究和應用。

本發明的優點在于：

多粘類芽孢桿菌培養液中富含β-葡聚糖酶，β-葡聚糖酶參與植物的免疫反 應，可以和幾丁質酶協同抑制真菌和某些細菌的生長。微生物細胞壁主要由葡聚 糖結構的高分子組成，在β-葡聚糖酶的作用下降解微生物細胞壁，造成細胞質 流失，最終抑制微生物的生長。