[發明專利]螨變應原特異性卵黃免疫球蛋白抗體及其抗過敏制劑

在審

• 申請號: 201810053167.2
• 申請日: 2018-01-19
• 公開（公告）號: CN108191975A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發明（設計）人: 謝民強
• 申請（專利權）人: 廣州益琪琳生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;A61K39/395;A61P11/02;A61P37/08;A61P11/06;A61P17/10
• 代理公司: 北京連城創新知識產權代理有限公司 11254
• 代理人: 劉伍堂

1.一種螨變應原特異性IgY抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

螨變應原制備：選取純化螨蟲體，采用Coca’s液提取方法，制得螨變應原粗提物；

免疫疫苗制備：將所述螨變應原粗提物溶解在0.1mol/L 的PBS 溶液中充分混勻，得到螨變應原溶液, 其蛋白濃度為2mg/ml；吸取1-1.5ml螨變應原溶液，加入5.25-6ml生理鹽水混勻，得到螨混合抗原溶液Ⅰ，按1:1 的比例將弗氏完全佐劑加入螨混合抗原溶液Ⅰ中混合均勻，制得乳狀螨復合抗原免疫佐劑Ⅰ，作為首免疫苗；吸取2-3ml螨變應原溶液，加入5.25-6ml生理鹽水混勻，得到螨混合抗原溶液Ⅱ，按1:1 的比例將弗氏不完全佐劑加入螨混合抗原溶液Ⅱ中混合均勻，制得乳狀螨復合抗原免疫佐劑Ⅱ，作為強化免疫疫苗；

對雞進行強化免疫：吸取所述首免疫苗劑量200μl，分別在雞的左右翅下各兩處進行皮下注入進行首次免疫，然后每隔10天使用所述強化免疫疫苗強化免疫一次，共強化免疫四次；在第三次和第四次強化免疫后分別收集經過強化免疫的雞所產的雞蛋，并在雞翅下采血，采血量為1-1.5ml，首次免疫和第一次強化免疫在產蛋前期進行；

IgY抗體的提取：對收集的雞蛋進行取蛋黃處理，1體積蛋黃加5-6體積的雙蒸水，充分攪拌混合均勻后，調試pH至5-6，然后將其置于4℃靜置8-10小時，冷凍離心15-30min，取上清液，獲得粗提物；

精提：在獲得的粗提物中加入60%硫酸鈉沉淀一次，再用14%硫酸鈉溶液沉淀兩次，取上清液進行超濾除菌、除離子獲得精提物；

純化：通過纖維素對獲得的精提物進行柱層析純化，得到螨變應原特異性IgY抗體。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述螨變應原粗提物包括：屋塵螨蛋白Der p1和Der p2、粉塵螨蛋白Der f1和Der f2。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述純化螨蟲體通過如下方法獲取：將螨蟲接種至面粉培養基，將所述面粉培養基置入溫度為25℃、相對濕度75%的恒溫箱中培養4-6周，形成螨蟲群落，將所述螨蟲群落連同部分面粉培養基移入裝有新鮮飼料的容器中繼續培養4-6周，重復上述操作獲得大量純螨，將獲得的大量純螨移入整體螨培養基進一步繁殖，獲得純化螨蟲體。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述進行強化免疫的雞為梅林雞、海蘭褐雞和京紅雞中的一種。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述進行強化免疫的雞的雞齡為120-150天，每只雞為1.2-1.5kg。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，在第三次和第四次強化免疫后分別收集經過強化免疫的雞所產的雞蛋，并對經過強化免疫的雞每6只抽取1只，在雞翅下采血，采血量為1-1.5ml。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述冷凍離心的速度為12000r/min。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述螨變應原特異性IgY抗體在制備治療由螨變應原引起的過敏性鼻炎和過敏性鼻炎伴哮喘的藥物中的用途。

9.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述螨變應原特異性IgY抗體在制備治療由螨變應原引起的過敏性皮炎的藥物中的用途，所述過敏性皮炎包括痤瘡。

10.根據權利要求1所述的螨變應原特異性IgY抗體制成的抗過敏制劑，其特征在于，按照重量百分含量計包括如下組分：

螨變應原特異性IgY抗體或其粗提物 0.15-2%；

羥乙基纖維素 0.5-1%；

木糖醇 0.5-1.0%；

丙三醇 1.0-2.0%；

聚山梨酯80 0.3-0.5%；

清涼醇 0.1-0.3%；

氯已定 0.01-0.02%；

雙蒸水 加至100%。