[發(fā)明專利]一種包裹納米金顆粒的兩性離子和嗎啡啉修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子的制備方法

有效

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• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN108395531B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設計）人: 史向陽;熊智娟;沈明武
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C08G73/02
• 分類號: C08G73/02;C08K3/08;C12N15/87;A61P35/00
• 代理公司: 上海泰能知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 31233
• 代理人: 黃志達;魏峯

本發(fā)明涉及一種包裹納米金顆粒的兩性離子和嗎啡啉修飾的聚酰胺?胺樹狀大分子的制備方法，包括：羧酸甜菜堿丙烯酰胺CBAA制備，G5.NH₂?CBAA制備，兩性離子和嗎啡啉修飾的聚酰胺?胺樹狀大分子溶液制備，包裹納米金顆粒的兩性離子和嗎啡啉修飾的聚酰胺?胺樹狀大分子制備。本發(fā)明制備的樹狀大分子表面具有豐富氨基，具有良好的基因轉染效果，為構建安全高效的基因載體，用于基因治療提供了應用依據(jù)；本發(fā)明反應條件簡單，合成制備易操作，制備得到的包裹納米金顆粒的兩性離子和嗎啡啉修飾的聚酰胺?胺樹狀大分子作為載體用于基因傳染，轉染條件簡單，轉染效率高，在癌癥的基因治療等方面具有潛在的應用前景。

技術領域

本發(fā)明屬于功能化高分子納米材料載體的制備方法領域，特別涉及一種包裹納米金顆粒的兩性離子和嗎啡啉修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子的制備方法。

背景技術

基因治療是指通過一定的方式把外源治療基因導入到靶細胞，以糾正或者補償因基因缺陷與異常所引起的疾病，進而達到治療疾病的目的。基因治療作為一種革命性的治療手段，已經(jīng)廣泛應用于遺傳病、腫瘤和病毒性疾病的治療當中，并且取得了一定的成效，已成為生命科學和臨床科學領域中最熱門的研究課題之一。

基因治療的關鍵在于尋找安全高效的基因載體，通常情況下，用于基因傳遞的載體包括病毒載體和非病毒載體。雖然病毒載體的研究開始的早，應用的早，但是隨著研究的深入，病毒載體高的免疫源性和高的毒性，限制了病毒載體在基因轉染領域的深入應用。近幾年來，科學研究者開始探索非病毒載體在基因轉染中的應用。在非病毒載體中聚酰胺-胺(PAMAM)樹狀大分子成為目前研究的熱點。這和其特有的有利于基因傳遞的性質有關聯(lián)，比如，納米級的球形結構易于被細胞吞噬，豐富的末端氨基可以被賦予不同的功能，內(nèi)部大的空腔可以包裹金納米顆粒以及其他的一些無機顆粒增加其剛性以及質粒DNA或siRNA的裝載量等。

目前的報道顯示，樹狀大分子仍具有高的毒性，因而限制了其在基因轉染領域的應用。為了解決這個難題，大多數(shù)研究者采用了在樹狀大分子表面接枝一些功能基團，比如乙酰基、聚乙二醇(PEG)、兩性離子和一些氨基酸等，希望降低樹狀大分子毒性的同時，增加樹狀大分子的基因轉染效率。本課題組前期的研究從樹狀大分子內(nèi)部空腔包裹納米金顆粒著手，形成樹狀大分子包裹的納米金顆粒，研究結果表明包裹納米金顆粒的樹狀大分子不但降低了樹狀大分子的毒性，而且增加了樹狀大分子的基因轉染效率(Shan etal.Biomaterials 2012,33,3025-3035)。因此探索結合上述兩種改造第五代樹狀大分子的方式對基因傳遞產(chǎn)生的增強作用是非常有意義的，即在第五代樹狀大分子表面修飾功能分子，同時在樹狀大分子的內(nèi)部包裹納米金顆粒，并且實現(xiàn)其對基因的負載和靶向運輸，是具有重要意義。

檢索國內(nèi)外相關文獻和專利結果表明：以兩性離子和嗎啡啉修飾的包裹金納米顆粒的PAMAM樹狀大分子為載體，用于基因轉染的方法，尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種包裹納米金顆粒的兩性離子和嗎啡啉修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子的制備方法，該方法制備得到的包裹納米金顆粒的兩性離子和嗎啡啉修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子，可以作為載體用于基因傳染，具有轉染條件溫和，易于操作，轉染效率高等優(yōu)點，可用于含血清環(huán)境中的pDNA轉染，在癌癥的治療等方面具有很好的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

本發(fā)明的一種包裹納米金顆粒的兩性離子和嗎啡啉修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子的制備方法，具體步驟如下：

(1)將β-丙內(nèi)酯與N-[(3-二甲基)丙基]丙烯酰胺以摩爾比為1-3:1溶于溶劑中，攪拌反應，抽濾，沖洗，干燥，得到羧酸甜菜堿丙烯酰胺CBAA，其中，β-丙內(nèi)酯與溶劑的比例為2g-3g:10mL；