[發(fā)明專利]芍藥屬油用植物油脂中酚類化合物的分析方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810048780.5
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN108254466A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王曉琴;李春煥
• 申請（專利權(quán)）人: 華僑大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;陳淑嫻

1.一種芍藥屬油用植物油脂中酚類化合物的分析方法，其特征在于包括以下步驟：

1)收集芍藥屬及相關(guān)植物中酚類化合物的名稱、CAS號、化學(xué)式及相對分子質(zhì)量信息，構(gòu)建數(shù)據(jù)庫；所述數(shù)據(jù)庫包括酚酸類化合物、黃酮類化合物、單萜苷類化合物、酚苷類化合物以及茋類化合物；

2)從待分析芍藥屬油用植物油脂中提取酚類化合物，溶解于甲醇水溶液中制得提取液；

3)通過超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀于負離子模式下得到所述提取液的總離子流色譜圖，通過定性軟件結(jié)合所述數(shù)據(jù)庫檢索得到提取液中含有的與數(shù)據(jù)庫中精確分子量一致的色譜峰，然后利用Q-TOF-MS質(zhì)譜分析器于負離子模式下選擇目標色譜峰進行二級質(zhì)譜分析，根據(jù)碎片離子信息推斷提取液所含的酚類化合物；其中色譜條件為：色譜柱ZORBAXEclipse Plus C18，柱溫30℃，流動相A為0.1％甲酸水溶液，流動相B為0.1％甲酸乙腈，流速為0.4mL/min，梯度洗脫程序為：0-3min，流動相A 95％-90％；3-4min，流動相A 90％-80％；4-8min，流動相A 80％-45％；8-10min，流動相A 45％-10％；平衡時間3min，進樣量2μL；質(zhì)譜條件為：離子源為ESI，離子采集范圍是100～1000m/z，毛細管電壓4000V，碎片電壓140V，干燥氣為9L/min高純N₂，鞘氣流速10L/min，噴霧氣電壓30psig；

4)將定性得到的酚類化合物進行分類歸屬，將具有每一類化合物母環(huán)結(jié)構(gòu)的標準品配制成不同濃度梯度的對照品溶液，于上述色譜-質(zhì)譜條件下，對系列梯度濃度對照品進行測定，以各個峰的色譜峰面積對分析物濃度作線性回歸得到標準曲線，利用標準曲線對分類后的每一類化合物分別定量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芍藥屬油用植物油脂中酚類化合物的分析方法，其特征在于：步驟2)中，所述提取液的制備方法為：稱取芍藥屬油用植物油脂油樣于離心管中，加入正己烷，振蕩溶解油樣后，再加入60％體積分數(shù)的甲醇水溶液，混勻并充分振蕩2～5min，然后在2000～4000rpm轉(zhuǎn)速下離心10～20min，收集下層甲醇相澄清液，重復(fù)以上步驟提取三次，收集三次提取液于38℃下旋蒸濃縮至干，最后用50％體積分數(shù)的甲醇水溶液再次溶解，溶解液過0.22μm有機濾膜后，密封冷藏備用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的芍藥屬油用植物油脂中酚類化合物的分析方法，其特征在于：所述油樣:正己烷:60％甲醇水溶液:50％甲醇水溶液的比例為1g:1.5～2.5mL:2～3mL:50～150μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芍藥屬油用植物油脂中酚類化合物的分析方法，其特征在于：步驟4)中，所述標準品包括苯甲酸、肉桂酸、對羥基苯乙酸、柚皮素、芍藥苷、丹皮酚和氧化白藜蘆醇。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芍藥屬油用植物油脂中酚類化合物的分析方法，其特征在于：步驟4)中，所述對照品溶液的制備方法為：將所述標準品分別溶解于甲醇中配制成單一標準品成分的儲備溶液，于-20℃下密封保存，通過稀釋所述儲備溶液得到不同濃度梯度的對照品溶液；所述儲備溶液中標準品和甲醇的比例為1mg:1mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芍藥屬油用植物油脂中酚類化合物的分析方法，其特征在于：所述酚酸類化合物包括苯甲酸、綠原酸、沒食子酸、芥子酸、對羥基苯甲酸、咖啡酸、阿魏酸、肉桂酸、對羥基苯乙酸、鄰苯二甲酸及香草酸。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芍藥屬油用植物油脂中酚類化合物的分析方法，其特征在于：所述黃酮類化合物包括柚皮素、圣草酚、牡荊素、葒草素和蘆丁。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芍藥屬油用植物油脂中酚類化合物的分析方法，其特征在于：所述單萜苷類化合物包括芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷、牡丹皮苷D、牡丹皮苷E、苯甲酰芍藥苷、苯甲酰氧化芍藥苷、牡丹皮苷C、牡丹皮苷A、牡丹皮苷H、牡丹皮苷J、沒食子酰芍藥苷及沒食子酰氧化芍藥苷。