[發(fā)明專利]赤霉酸種子液的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810048047.3
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN107974413A
• 公開（公告）日: 2018-05-01
• 發(fā)明（設計）人: 劉健;楊寶強;沈頌娣;熊仁科;齊昊
• 申請（專利權）人: 四川龍蟒福生科技有限責任公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P27/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權代理有限公司11227
• 代理人: 張雪嬌,趙青朵

技術領域

本發(fā)明屬于赤霉酸制備技術領域，尤其涉及一種赤霉酸種子液的制備方法。

背景技術

赤霉酸是通過一種赤霉菌發(fā)酵培養(yǎng)代謝得到的一類次級代謝產(chǎn)物，被分離、鑒定和命名的一種有116種，其中在農(nóng)業(yè)中應用最廣泛的就是GA₃，在我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮著巨大的作用。

GA₃具有非常高的植物調(diào)節(jié)活性，對各種農(nóng)作物的生長和發(fā)育都有很明顯的調(diào)節(jié)作用。在北方，GA₃主要應用于葡萄、紅棗、山楂、油桃等經(jīng)濟作物上，在花期噴灑一定濃度赤霉酸溶液可以有效提高果樹的坐果率，促進果實生長發(fā)育，果樹產(chǎn)量提高20％～30％左右。在南方，赤霉酸主要應用于雜交水稻制種上，調(diào)節(jié)水稻父母本在同一時間開花，使母本授粉率大幅提高，進一步提高了雜交水稻種子的產(chǎn)量，降低了種子的生產(chǎn)成本，為農(nóng)民減輕了負擔。

目前赤霉酸發(fā)酵行業(yè)的通用種子培養(yǎng)基主要為以下組分：葡萄糖0.5％，可溶性淀粉3％，花生餅粉0.3％，黃豆餅粉0.5％，MgSO4·7H₂O 0.1％，KH₂PO₄0.1％，pH自然。按照以下制備方法制備：從GA3保藏菌種斜面取1～2環(huán)菌種接至種子搖瓶中，震蕩培養(yǎng)；然后將GA₃菌種接種到種子罐中進行培養(yǎng)，得到懸浮液；再將得到的懸浮液繼續(xù)在種子罐內(nèi)培養(yǎng)，最后接種到發(fā)酵罐內(nèi)進行發(fā)酵，得到發(fā)酵液。但GA₃菌種需多次活化，使菌種的遺傳穩(wěn)定性面臨更多的考驗，大規(guī)模生產(chǎn)不同批次的產(chǎn)酸水平可能存在較大的差異性。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術問題在于提供一種赤霉酸種子液的制備方法，該制備方法無需經(jīng)斜面活化的過程。

本發(fā)明提供了一種赤霉酸種子液的制備方法，包括：

S1)將冷凍保藏的GA₃菌種接入至種子培養(yǎng)基中進行搖瓶培養(yǎng)，得到懸浮液；所述種子培養(yǎng)基包括5～15g/L第一有機氮源、5～15g/L第一小分子有機碳源、1～5g/L磷酸二氫鉀、0.1～1g/L硫酸鎂與0.1～1g/L聚丙二醇；

S2)將所述懸浮液轉(zhuǎn)入種子罐中進行發(fā)酵培養(yǎng)，得到種子液；所述種子罐的培養(yǎng)基包括5～15g/L第二有機氮源、5～15g/L第二小分子有機碳源、1～5g/L磷酸二氫鉀、0.1～1g/L硫酸鎂與0.1～1g/L聚丙二醇。

優(yōu)選的，所述步驟S2)還包括：

發(fā)酵培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)入二級種子罐中繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)，得到種子液；所述二級種子罐的培養(yǎng)基包括5～15g/L第三有機氮源、5～15g/L第三小分子有機碳源、1～5g/L磷酸二氫鉀、0.1～1g/L硫酸鎂與0.1～1g/L聚丙二醇。

優(yōu)選的，所述第一有機氮源、第二有機氮源與第三有機氮源各自獨立地選自大豆蛋白、花生餅粉、棉籽餅粉、玉米漿、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉與魚粉中的一種或多種。

優(yōu)選的，所述第一小分子有機碳源、第二小分子有機碳源與第三小分子有機碳源各自獨立地選自蔗糖、葡萄糖、糖蜜、淀粉糊精、甘露糖與半乳糖中的一種或多種。

優(yōu)選的，所述步驟S1)中搖瓶培養(yǎng)的溫度為28℃～30℃；搖瓶培養(yǎng)的時間為60～80h。

優(yōu)選的，所述步驟S2)中發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為28℃～30℃；發(fā)酵培養(yǎng)的時間為48～72h；發(fā)酵培養(yǎng)的壓力為0.01～0.05MPa；所述發(fā)酵培養(yǎng)的空氣流量為60～70Nm³/h。

優(yōu)選的，所述步驟S2)中繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為28℃～30℃；繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)的時間為15～25h；繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)的壓力為0.01～0.05MPa；所述繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)的空氣流量為600～800Nm³/h。

優(yōu)選的，所述種子培養(yǎng)基包括10g/L第一有機氮源、10g/L第一小分子有機碳源、3g/L磷酸二氫鉀、0.6g/L硫酸鎂與0.5g/L聚丙二醇；

所述種子罐的培養(yǎng)基包括10g/L第二有機氮源、10g/L第二小分子有機碳源、3g/L磷酸二氫鉀、0.6g/L硫酸鎂與0.5g/L聚丙二醇；

所述二級種子罐的培養(yǎng)基包括10g/L第三有機氮源、10g/L第三小分子有機碳源、3g/L磷酸二氫鉀、0.6g/L硫酸鎂與0.5g/L聚丙二醇。

優(yōu)選的，所述種子罐的培養(yǎng)基與二級種子罐的培養(yǎng)基的pH值各自獨立地為4.5～5.5。