[發明專利]一種金花茶多糖的提取工藝

在審

• 申請號: 201810046711.0
• 申請日: 2018-01-18
• 公開（公告）號: CN107964052A
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發明（設計）人: 陳俊丞
• 申請（專利權）人: 廣西天昌投資有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P1/16
• 代理公司: 廣州勝沃園專利代理有限公司44416
• 代理人: 孫文卉

技術領域

本發明屬于生物提取技術領域，具體涉及一種金花茶多糖的提取工藝。

背景技術

金花茶為山茶科、山茶屬、金花茶組和金花茶系植物，于1960年在廣西首次發現并于1965年正式發表，引起了國內外植物學界和園藝學界的關注，尤其引起國際山茶學會的高度重視。在國內金花茶被譽為茶族皇后和植物界的大熊貓，在國外則被稱為幻想中的黃色山茶。現代藥理實驗證明金花茶在抑菌、抗氧化、抗過敏等方面表現出潛在的藥用價值。金花茶含有多種化學成分包括黃酮類、茶多酚、茶多糖、皂苷類、多種氨基酸以及多種對人體有益的微量元素和維生素等。但是長期以來對金花茶的開發利用非常局限，大多就是使用花作為茶飲料或者裝飾工藝品，莖葉等其他部分的開發報道不多，造成整體開發不足資源浪費。

多糖又稱多聚糖是由醛糖或酮糖通過脫水形成糖苷鍵并以糖苷鍵線性或分枝連接而成的鏈狀聚合物，僅由一種單糖組成的多糖稱為同聚糖，由一種以上的單糖組成的多糖稱為雜聚糖，是自然界中含量最豐富的生物聚合物也是構成生命活動的四大基本物質之一，研究成果表明糖類是生物體內除蛋白質和核酸以外的又一類重要的生物分子尤其是一類重要的信息分子。

中國專利CN103739735B公開了一種從黑茶花中提取茶多糖的方法，包括原料粉碎、第一次震蕩提取、第二次震蕩提取、一次濃縮、沉淀、上柱、二次濃縮和干燥等步驟，具有操作簡單、流程短等特點，既可用于從黑茶花中提取茶多糖，也可用于從黑茶或其它茶葉或油茶粕中提取茶多糖。

中國專利申請CN106866833A公開了一種具有抗應激作用的金花茶多糖及其制備方法，技術方案為取金花茶的細枝或葉，打成粗粉用10倍重量的85％乙醇室溫滲漉24h后放出滲漉液重復3次，合并滲漉液，減壓濃縮得到醇提物可另做他用。藥渣加入10倍重量的水，加熱回流2h，濾過重復3次合并濾液減壓濃縮到少量體積后，加入90％乙醇，使溶液的乙醇含量達到80％，靜置24h，3000r/min離心10min，取出沉淀即為粗多糖。

但現有金花茶多糖的提取方法存在提取效率低、消耗時間長和純度低等問題，因此有必要開發一種新的提取效率高、消耗時間短，進而將提取得到的金花茶多糖用于免疫性肝損傷等的保護性能研究。

發明內容

為解決現有技術中存在的問題，本發明提供一種金花茶多糖的提取工藝。

本發明一種金花茶多糖的提取工藝，包括以下步驟：

S1、將金花茶葉片清洗后用打粉機粉碎過10-20目篩，得金花茶葉粉末；

S2、取步驟S1所得金花茶葉粉末10-20g置于錐形瓶中，加蒸餾水200-600ml和0.4-3.6g水解酶，調節pH至5-6，在室溫下向混合液中先通入常壓正向電流處理10-20s后通入常壓反向電流處理6-8s，反復處理40-60min后切斷電源，其中所述的通電頻率為6-8kHz、電流為4-6kV；

S3、將步驟S2通電處理后的混合液超聲提取0.5-2h后用2-4層200目紗布過濾收集濾液，所得濾渣用所述超聲方法再次提取，合并濾液濃縮得粗多糖；

S4、磁力攪拌下向步驟S3所得粗多糖中加入沉淀試劑，攪拌20-40min后放于3-5℃冰箱中靜置18-24h，使蛋白質變性成不溶性沉淀聚集在沉淀試劑的界面上，1000-2000r/min離心分離將蛋白質沉淀去除，重復操作直至沉淀試劑界面無沉淀，收集上清液和蛋白質沉淀備用；

S5、將步驟S4所得上清液濃縮后攪拌下加入95％的乙醇溶液，將溶液中生成的絮狀沉淀置于4-6℃冰箱中靜置20-28h，2000-4000r/min離心，得沉淀物；

S6、將步驟S5所得沉淀物用4-6倍體積水溶解后裝入2-4倍沉淀物質量的由己內酰胺和聚丙烯酰胺按質量比2:1組成的層析柱中，用3-5倍柱體積水洗脫液于2-3ml/min速度下洗脫，合并洗脫液并減壓濃縮，冷凍干燥即得。

優選的，步驟S2所述的水解酶由木瓜蛋白酶、果膠酶和纖維素酶按質量比1:4:5組成。

優選的，步驟S3所述的超聲波提取溫度為50-55℃、頻率為25-55kHz。

優選的，所述的超聲波提取溫度52℃、頻率40kHz。

優選的，步驟S4所述的粗多糖和沉淀溶劑的體積比為5:1。

優選的，步驟S4所述的沉淀試劑由CHCl₃和正丁醇按體積比4:1組成。

再優選的，步驟S5所述的乙醇溶液的體積為上清液的2-4倍。