[發明專利]快速檢測漢賽巴爾通體的引物及制備方法和試劑盒

在審

• 申請號: 201810044923.5
• 申請日: 2018-01-17
• 公開（公告）號: CN108165644A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 孟慶玲;喬軍;李重陽;喬夢凡;伍曄暉;孟丹;貢莎莎;王熙鳳;李靜;張凱;田路路;張星星;張再超
• 申請（專利權）人: 石河子大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12Q1/6844;G01N33/569;C12Q1/6806;C12R1/01
• 代理公司: 石河子恒智專利商標代理事務所(普通合伙) 65102
• 代理人: 李伯勤

本發明公開了一種本發明涉及一種漢賽巴爾通體基因組DNA可視化快速檢測方法的建立，屬生物技術領域，篩選出1對特異性高、敏感性強的RPA引物，即上游引物<210>2和上游引物<210>2，建立了檢測Bh基因組DNA的RPA檢測體系。與常規PCR方法相比，RPA?LFA具有對儀器設備要求低(只需要一個恒溫水浴鍋)、檢測速度快(約40min)、檢測結果的可視化(可以直接用肉眼觀察檢測結果)等優點，這些優點使得本發明建立的RPA?LFA方法可以用于寵物醫院貓Bh感染的快速檢測和診斷。

技術領域

本發明涉及一種漢賽巴爾通體基因組DNA可視化快速檢測方法的建立，屬生物技術領域。

背景技術

巴爾通體病(Bartonellosis)是由不同種與亞種巴爾通體(Bartonella)引起的一類世界性分布的重要人獸共患傳染病，是近年來在我國新發傳染病之一。貓抓病(Cat-scratch disease，CSD)是巴爾通體病(Bartonellosis)中的一種，主要是由漢賽巴爾通體(Bartonella henselae，Bh)引起的新發人獸共患病。貓是該病原的天然宿主，當貓感染Bh后可以長期保持菌血癥，但不出現明顯的臨床癥狀，并且可通過直接抓傷或咬傷將其傳染給人，也可以通過貓蚤叮咬進行間接傳播。該病在美國、德國、法國、荷蘭、瑞士、意大利、澳大利亞、日本等國均存在，多發于兒童和青少年。近年來，隨著我國寵物貓飼養量的增加，該病已經在我國江蘇、浙江、安徽、山東和上海等20余個省市報道，人群感染Bh的病例呈快速上升的趨勢。

巴爾通體(Bartonella)是一種細小球狀、桿狀或環狀的多形性微生物，革蘭氏染色陰性，姬姆薩染色呈紫色或藍色，Maechiavell染色呈紅色，無鞭毛。在分類上，巴爾通體屬變形菌綱、根瘤菌目、巴爾通體科、巴爾通體屬成員，目前已經發現了22個種和亞種，其中至少9種對人有致病性，主要包括:桿菌樣巴爾通體(Bartonella bacilliform)、五日熱巴爾通體(Bartonella quintana)、漢賽巴爾通體(Bartonella henselae)、伊麗莎白巴爾通體(Bartonella elizabethae)、文氏巴爾通體阿氏亞種(Bartonella vinsoniiarupensis)、文氏巴爾通體格霍夫亞種(Bartonella vinsonii subsp.Berkhoffii)、克氏巴爾通體(Bartonella clarridgeiae)、格雷范姆巴爾通體(Bartonella grahamii)和文氏巴爾通體文森亞種(Bartonella vinsonii subsp.vinsonii)等9種。

貓是Bh的自然宿主，也是人感染Bh的重要傳染源，因此防控人群Bh的感染急需要加強對寵物貓Bh感染的檢測。

目前，Bh感染常用的實驗室檢測方法包括病原學檢測、血清學檢測和分子生物學檢測。由于該病原的特殊性，對營養要求十分苛刻，初次分離培養Bh的時間較長，因此病原學檢測比較困難。

間接免疫熒光檢測法(IFA)是檢測Bh常用的血清學方法，目前用于Bh感染的檢測技術已形成商品化試劑盒，但IFA診斷方法在實際應用中仍存在諸多問題：首先，IFA檢測需要價格昂貴的熒光顯微鏡；其次，該方法的檢測結果完全依靠人工判讀，易受檢測技術人員經驗的影響。

PCR作為分子生物學檢測常用的方法，由于其快速、特異和敏感，已廣泛運用于Bh基因組DNA的檢測。目前，用于Bh感染的PCR檢測靶基因包括16S rRNA、枸櫞酸合酶基因(gltA)、groEL和pap31基因等。然而，PCR方法也存在一定不足之處，如需要專門的儀器設備和技術，限制了該方法在臨床上大規模的應用。