[發明專利]一種人的細胞色素c氧化酶突變蛋白及其應用

在審

• 申請號: 201810042828.1
• 申請日: 2018-01-17
• 公開（公告）號: CN108359647A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 張耀洲;吳玉乾;馮建華;李冬梅;張樹軍;胖鐵良;陳玉皎;王文雅
• 申請（專利權）人: 天津市湖濱盤古基因科學發展有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12Q1/6886;C40B40/08;C07K16/40;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/573
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種人的細胞色素c氧化酶突變蛋白及其應用，通過將大量癌癥患者作為研究病例，對病例進行基因檢測并分析，確定出人的細胞色素c氧化酶突變蛋白，根據該人的細胞色素c氧化酶突變蛋白制備基因芯片、單克隆抗體和ELISA試劑盒，為癌癥的基因診斷提供指引作用，實現癌癥的早診斷、早發現和相關治療。

技術領域

本發明涉及一種基因工程領域，尤其涉及一種人的細胞色素c氧化酶突變蛋白及其應用。

背景技術

細胞色素c氧化酶電子傳遞鏈末端的酶。具有質子泵的作用，可將H+由基質抽提到膜間隙，同時可通過血紅素中鐵原子的氧化還原變化，把電子傳遞給還原的氧形成水。在細胞呼吸中處于細胞色素系統的末端。細胞色素c氧化酶是把呼吸底物的電子經過細胞色素系統直接傳遞給分子態氧(即具有自動氧化作用)。

研究發現細胞色素c氧化酶與癌癥的發生關系密切。人的細胞色素c氧化酶發生突變會對人類健康造成影響，研究發現，在對某些癌癥(該癌癥包括肺癌、肝癌、胰腺癌和白血病)患者的外周血進行基因測序的過程中，均發現患者的細胞色素c氧化酶發生了突變，因此，對人的細胞色素c氧化酶突變的檢測對判斷人體是否患有癌癥具有一定的指引作用。

發明內容

本發明目的在于提供一種人的細胞色素c氧化酶突變蛋白及其應用。

本發明技術方案包括：

第一方面，提供一種人的細胞色素c氧化酶突變蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

第二方面，提供一種人的細胞色素c氧化酶突變蛋白的編碼基因，其核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示。

第三方面，提供一種基因芯片，包括：固相載體和固定在該載體上的核苷酸探針；所述核苷酸探針根據所述人的細胞色素c氧化酶突變蛋白的核苷酸序列，與人的細胞色素c氧化酶正常蛋白的核苷酸序列的比對結果確定。

優選地，所述核苷酸探針為SEQ ID NO:3所示的堿基序列。

第四方面，提供一種特異性識別人的細胞色素c氧化酶突變蛋白的單克隆抗體，其編碼的氨基酸序列為SEQ ID NO:1所示。

第五方面，提供一種用于檢測人的細胞色素c氧化酶突變蛋白的抗體的ELISA試劑盒，所述ELISA試劑盒包括：包被有上述單克隆抗體的ELISA酶標板、酶標二抗、檢測對象的細胞色素c氧化酶蛋白、樣品稀釋液、包被緩沖液、ELISA酶標板洗滌液、顯色液和終止液。

優選地，所述酶標二抗為稀釋的HRP辣根過氧化物酶標記的山羊抗人IgG。

第六方面，提供一種基于上述任一所述ELISA試劑盒檢測人的細胞色素c氧化酶突變蛋白的抗體的方法，包括：

a、使用所述包被緩沖液對上述單克隆抗體進行稀釋，并將稀釋后的所述單克隆抗體加樣至ELISA酶標板的孔中，室溫孵育；

b、使用所述樣品稀釋液將檢測對象的細胞色素c氧化酶蛋白稀釋成不同濃度梯度，并將不同濃度梯度的細胞色素c氧化酶蛋白分別加樣至ELISA酶標板的孔中，室溫孵育；

c、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標板洗滌液，洗滌并甩干；

d、加入所述酶標二抗，并室溫孵育；

e、甩去各孔中的液體，加入所述ELISA酶標板洗滌液，洗滌并甩干；

f、加入所述顯色液，室溫避光孵育，并加入所述終止液終止反應；

g、在酶標儀上測定波長為450nm處的吸光值。

優選地，進一步包括：空白對照實驗。