[發明專利]一種鑒定大白菜抗根腫病的分子標記KB1、引物及應用

有效

• 申請號: 201810042406.4
• 申請日: 2018-01-17
• 公開（公告）號: CN108018375B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 王超楠;華德平;黃志銀;李梅;范偉強;王濤
• 申請（專利權）人: 天津科潤農業科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

本發明公開了一種與大白菜根腫病抗性基因Crr1a共分離的InDel分子標記KB1、引物及其應用。本發明提供了鑒別或輔助鑒別大白菜是否含有抗根腫病基因Crr1a的方法，包括以待檢測大白菜基因組為模板，以本發明提供的引物進行PCR擴增，根據擴增產物的大小，判斷待檢測大白菜是否含有抗根腫病基因Crr1a，是否為抗根腫病大白菜。利用本發明的分子標記對抗根腫病大白菜進行輔助選擇，準確性高，成本低，省時省力。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種鑒別大白菜根腫病抗性的分子標記KB1、引物及其應用。

背景技術

大白菜（Brassica rapa L. ssp. pekinensis）屬于十字花科蕓薹屬，是我國種植面積和產量最大的蔬菜作物之一。根腫病是由根腫菌（Plasmodiophora brassicaeWoronin）引起的土傳性疾病，可導致大白菜等十字花科植物的根部異常腫大，形成根瘤，是一種嚴重的世界性的十字花科植物根部病害，每年可導致全球十字花科蔬菜10%-15%的減產，在發病嚴重地區，甚至造成絕產，嚴重威脅十字花科蔬菜的生產。該病最早發現于歐洲，近年來，我國絕大多數省市自治區都有關于根腫病發生的報道，特別是在云南、湖北、遼寧、山東等地區，給我國大白菜等蔬菜的生產造成了巨大影響。

雖然可以采取物理和化學等對根腫菌進行防治，但成本較高，且效果并不明顯。培育抗根腫病的新品種，是防治大白菜根腫病最經濟、最有效的措施。傳統的抗根腫病育種中，每一代都需要采用田間接種病原菌進行性狀鑒定的方法，費時費力，且容易受到環境因素的影響。分子標記輔助選擇（Marker-assisted selection, MAS）技術為育種工作提供了有利工具，該技術是利用與目標基因連鎖的分子標記，通過DNA水平的檢測完成都目標性狀的選擇，提高選擇效率，減少工作量，加快育種進程。

利用Williams鑒別系統，對根腫菌的生理小種進行鑒定，發現4號生理小種是我國根腫菌的優勢種，致病性強，危害最為嚴重。在大白菜不同染色體上，至少發現8個根腫病抗性基因或QTLs，其中，在大白菜A08染色體上，有一個抗根腫病基因Crr1a，對4號生理小種具有抗性。雖然有部分與該位點連鎖的分子標記公布，但是其連鎖性不夠高，有一定的假陽性產生，或者檢測時，抗病與感病材料差異不明顯，結果容易混淆。開發合適的分子標記，用于大白菜抗根腫病品種或品系的選育，可以減少工作量，提高工作效率，降低育種成本，加快育種進程，具有很高的實際應用價值。

發明內容

對于大白菜抗根腫病品種或品系的選育，傳統方法需要每代都在田間進行根腫菌接種鑒定抗病性，具有費時、費力易受環境影響等缺點，本發明提供了一種鑒定大白菜根腫病抗性的InDel分子標記、引物及其應用，利用該分子標記可以在大白菜苗期進行DNA水平的鑒定，從而大白菜克服傳統育種中需要接種病原菌鑒定抗病性的缺點，簡化大白菜抗根腫病品種或品系的培育過程。

本發明提供了一種鑒別或者輔助鑒別大白菜是否為抗根腫病大白菜的InDel分子標記KB1，所述的分子標記單鏈DNA序列從5’端到3’端為： TTCTCAAGATTAGTCATATTACTAATAGAAGAGGGGAGCTCCACAAGGCTAGAGCATCCAGAAAGATTCAAATTCTCAAGATTAGTCATGTTACCAATAGAAGAGGGGAGTTCCATAAGGCTTGAGCACAGCTTGAGATTCAATTTCTTGAGATTAGTCAAATTCCCAATAGAAGAAGGAAGCTCCATAAGACTTGAACATC

本發明還提供了一種上述鑒定大白菜是否為抗根腫病大白菜的分子標記的特異性引物，其單鏈DNA序列從5’端到3’端為：

上游引物F：TTCTCAAGATTAGTCATATTACTAA