[發明專利]一種應用KASP技術進行高通量轉化體特異性檢測的方法

有效

• 申請號: 201810041162.8
• 申請日: 2018-01-16
• 公開（公告）號: CN108018337B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 楊翅春;鄭秀婷
• 申請（專利權）人: 華智生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 北京市中聯創和知識產權代理有限公司 11364
• 代理人: 謝威;康秀敏

1.一種應用KASP技術進行高通量轉化體特異性檢測的方法，其特征在于，所述檢測方法包括如下步驟：(1)設計轉化體靶標序列的引物及內源基因的引物，轉化體靶標序列的引物設計時，一條引物設計在外源插入片段區域，另一條設計在插入片段側翼的植物基因組區域，擴增片段的長度在50-120bp之間；內源基因的引物設計策略是：正向和反向引物都設計在作物的內源基因區域，擴增片段的長度在50-120bp之間；(2)提取樣品的DNA；(3)利用轉化體靶標序列的引物、內源基因的引物進行KASP檢測；（4）若從某樣品的產物中同時檢測出FAM熒光和HEX熒光，則表明該樣品含有相應的轉化體成分；若從某樣品僅檢測到HEX熒光，沒有檢測到FAM熒光，則表明該樣品不含有相應的轉化體的成分；

步驟(1)中，轉化體靶標序列的引物為引物組1-8中的一組或多組；內源基因的引物為引物組9-12中的一組或多組；

所述引物組1-8為：

所述引物組9-12為：

。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(3)具體包括，內源基因檢測；轉化體成分檢測。

3.根據權利要求1所述方法，其特征在于：所述KASP檢測的反應體系為連接了標簽序列的轉化體靶標序列的引物和內源基因的引物、DNA模板以及KASP反應液。

4.一種轉基因產品檢測試劑盒，包括引物組1-8中的一組或多組，及引物組9-12中的一組或多組；

所述引物組1-8為：

所述引物組9-12為：

。

5.根據權利要求1-3中任意一種所述的方法或權利要求4中所述的檢測試劑盒在對產品進行轉基因檢測中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述產品為玉米、油菜、水稻或大豆，通過KASP高通量地檢測樣品中是否含有轉化體成分。