[發明專利]一種鮟鱇魚骨抗腫瘤十肽的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201810040290.0
• 申請日: 2018-01-16
• 公開（公告）號: CN108359702A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 黃芳芳
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K7/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;A61K38/08;A61P35/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 翁霽明

一種鮟鱇魚骨抗腫瘤十肽的制備方法及應用，所述的制備方法是：a）碎料：用高速組織搗碎機將鮟鱇魚骨進行搗碎處理；b）酶解：選用中性蛋白酶對鮟鱇魚骨粉進行酶解，制成鮟鱇魚骨粉酶解液；c）超濾：將鮟鱇魚骨粉酶解液加入超濾系統，用10KD、5KD、3KD的超濾膜進行超濾，收集>10KD、10?5KD、5?3KD和<3KD分子量的酶解液，進行冷凍干燥。

技術領域

本發明涉及的是一種鮟鱇魚骨抗腫瘤十肽的制備方法及應用，尤其是一種對前列腺癌細胞具有抑制作用的鮟鱇魚骨抗腫瘤十肽的制備方法及應用。

背景技術

傳統的治療手段主要包括前列腺癌根治切除術、激素治療、化療、放射治療等，但治療后癌癥很難根除，復發率極高。因此，從海洋中尋找一種高效、低毒和具有較強特異性的新型抗腫瘤藥物具有重要的研究意義和臨床意義。

在水產品加工過程中，會產生大量的下腳料（包括 魚頭、魚皮、魚鰭、魚尾、魚骨及其殘留魚肉），其質量約占原料魚的30%～55%，不同部位膠原蛋白的含量從20%～50%不等。鮟鱇魚（Lophius litulon）屬冷溫性底層魚類，常棲伏海底，分布于北太平洋西部，我國產于東海北部、黃海及渤海。近年來我國鮟鱇魚出口需求旺盛，產量和價格大幅增加，鮟鱇魚出口己成為我國的新興漁業。然而，在鮟鱇魚的加工中，大量魚皮被作為下腳料而廢棄，這不僅污染了環境，也造成了資源的浪費。目前，為了提高鮟鱇魚皮的經濟附加值，已有學者開始研究從鮟鱇魚加工副產物中提取硫酸皮膚素、硫酸 軟骨素、膠原蛋白等。

活性肽是由兩個或兩個以上的氨基酸以肽鍵相連的化合物，在人體內起重要生理作用，發揮生理功能，如：調節體內的水分、電解質平衡；促進傷口愈合；修復細胞、改善細胞代謝，能起到防癌作用等。活性肽一般通過酶解生物活性材料獲得，研究發現食物蛋白通過蛋白酶酶解方式，可以得到功能多樣的活性多肽。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種通過蛋白酶對鮟鱇魚魚骨進行酶解以獲得一種對前列腺癌細胞具有抑制作用的、提取的多肽得率高的鮟鱇魚骨抗腫瘤十肽的制備方法及應用。

本發明的目的是通過如下技術方案來完成的，一種鮟鱇魚骨抗腫瘤十肽的制備方法，它選用鮟鱇魚骨作為原料，所述的制備方法包括如下步驟：

a）碎料：用高速組織搗碎機將鮟鱇魚骨進行搗碎處理，制成粉狀和微顆粒狀的鮟鱇魚骨粉；

b）酶解：選用中性蛋白酶對鮟鱇魚骨粉進行酶解，制成鮟鱇魚骨粉酶解液；

c）超濾：將鮟鱇魚骨粉酶解液加入超濾系統，用10KD、5KD、3KD的超濾膜進行超濾，收集&gt;10KD、10-5KD、5-3KD和&lt;3KD分子量的酶解液，進行冷凍干燥，

d）將鮟鱇魚酶解液過G-25洗脫液得到5個峰，經體外抗腫瘤實驗篩選，峰2和峰3具有最高的抗腫瘤活性的，收集峰2和峰3，冷凍干燥，進一步分離純化并用高效液相純度檢測；

e）經過反相高效液相色譜(RT- HPLC)純化及氨基酸序列檢測：峰2用HPLC檢測發現，該分子段只有1個洗脫峰，并進行氨基酸序列檢測，其氨基酸序列為Ala-Pro -Phe-His-Asp-Ser-Asp-Gln-Asn- Cys；制成鮟鱇魚骨抗腫瘤十肽產品。

作為優選：所述的步驟b）酶解條件為：pH:7.0-7.5，溫度：40-45℃，料液比：1:1，時間：5-7h, 加酶量:1200-1500 u/g；所述的步驟c中，制成的鮟鱇魚骨抗腫瘤十肽產品，其氨基酸序列為Ala-Pro -Phe-His-Asp-Ser-Asp-Gln-Asn- Cys。