[發(fā)明專利]一種包含超級增強型TIL細胞的免疫細胞藥物

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810037682.1
• 申請日: 2018-01-16
• 公開（公告）號: CN110042126A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 谷為岳
• 申請（專利權(quán)）人: 北京卡替醫(yī)療技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/861;C12N15/864;A61P35/00
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1.一種免疫細胞制備方法，制備“超級增強型TIL細胞(SuperTIL)”，其特征在于：

1)所述SuperTIL是將一種或多種靶向B細胞表面蛋白的嵌合抗原受體(以下或簡稱“BCAR”)和一種或多種免疫抑制-共刺激信號反向轉(zhuǎn)換分子(以下或簡稱“Switch”)表達在腫瘤浸潤T淋巴細胞(TIL)或外周血游離腫瘤浸潤T淋巴細胞(pTIL)表面制備而得；

2)所述BCAR具有以下特征：

A.所述B細胞表面蛋白包括CD19、CD20、CD22以及其他任何B細胞廣泛表達的膜蛋白：

B.所述BCAR結(jié)構(gòu)包括CD3ζ和靶向上述B細胞表面蛋白的抗體的可變區(qū)；

C.所述BCAR結(jié)構(gòu)可以包括CD28、41BB在內(nèi)的共刺激因子以及其他基因或蛋白修飾，也可以不包括這些共刺激因子以及其他基因或蛋白修飾；

D.所述BCAR結(jié)構(gòu)可以包括或不包括TET-ON或其他任何一種CAR或CAR-T細胞表達調(diào)控以及令CAR-T細胞自殺或凋亡的開關(guān)的元件；

E.所述B-CAR結(jié)構(gòu)包含或不包含靶向CD19的抗體可變區(qū)，其序列如序列表SEQ ID NO：1所顯示

3)所述腫瘤浸潤T淋巴細胞(TIL)是由以下方法獲得的包含單種或多種TCR序列的克隆的T細胞混合物：從腫瘤組織中分離腫瘤浸潤T淋巴細胞(TIL)而得，或進行或不進行對TIL的進一步擴增、改造或以包括但不限于PD1、CD137、TIM3等任意一種或幾種分子為標志物的篩選；

4)所述外周血游離腫瘤浸潤T淋巴細胞(pTIL)是由由以下方法獲得的包含單種或多種TCR序列的克隆的T細胞混合物：對外周血中的T細胞進行PD1、CD137、TIM3等一種或幾種標志物進行篩選而得，或進行或不進行對其進一步擴增或改造；

5)所述免疫抑制-共刺激信號反向轉(zhuǎn)換分子(Switch)包含以下ABCDEFG任意一種或多種特征：

A.所述Switch是由任意一種免疫抑制蛋白與任意一種共刺激信號蛋白二者形成的蛋白復(fù)合物或融合蛋白，所述免疫抑制蛋白表達在胞外或跨膜區(qū)，所述蛋白復(fù)合物或融合蛋白跨膜表達

B.所述免疫抑制蛋白是包括PD1、CTLA4，BTLA，TIM3，TIGIT，TGFβ受體以及其他任意具有免疫抑制功能或與免疫抑制信號通路相關(guān)的蛋白中的任意一種蛋白，或用任意一種具有免疫抑制功能或與免疫抑制信號通路相關(guān)的蛋白的配體的單克隆抗體如PDL1單抗；

C.所述共刺激信號蛋白是包括CD28、41BB以及其他任意具有T細胞共刺激信號功能的蛋白中的任意一種蛋白；

D.所述免疫檢查點-共刺激因子轉(zhuǎn)換分子包含一種PD1-CD28轉(zhuǎn)換分子，其序列如序列表SEQ ID NO：2所顯示；

E.所述免疫檢查點-共刺激因子轉(zhuǎn)換分子包含一種TIM3-CD28轉(zhuǎn)換分子，其序列如序列表SEQ ID NO：3所顯示；

F.所述免疫檢查點-共刺激因子轉(zhuǎn)換分子包含一種TGFBR2-CD28轉(zhuǎn)換分子，其序列如序列表SEQ ID NO：4所顯示；

G.所述Switch的結(jié)構(gòu)，可以包含或不包含免疫抑制蛋白與共刺激信號蛋白之外的其他蛋白或元件，包括但不限于自殺開關(guān)等起表達調(diào)控作用的蛋白或元件。

2.如權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述BCAR或Switch在所述TIL或pTIL的表達，可以由以下任一方法實現(xiàn)：

1)運用慢病毒或腺病毒或腺相關(guān)病毒等任意一種可將所述BCAR或Switch轉(zhuǎn)染在所述TIL或pTIL細胞基因組并穩(wěn)定表達的轉(zhuǎn)染載體或媒介及方法或系統(tǒng)而實現(xiàn)；

2)將所述BCAR或Switch的mRNA序列電擊轉(zhuǎn)染進入所述TIL或pTIL細胞內(nèi)而實現(xiàn)。

3)多種不同靶標或形式的BCAR可以被裝在同一載體上，同時轉(zhuǎn)入TIL或pTIL細胞，也可以分別裝載在各自不同的載體上，將多種載體混合而同時轉(zhuǎn)入TIL或pTIL細胞，或不混合，各自分別分批轉(zhuǎn)入TIL或pTIL細胞而最終將各批TIL或pTIL細胞混合或序貫使用；

4)多種不同形式的Switch可以被裝在同一載體上，將多種載體混合而同時轉(zhuǎn)入TIL或pTIL細胞，或不混合，各自分別分批轉(zhuǎn)入TIL或pTIL細胞而最終將各批TIL或pTIL細胞混合或序貫使用；

5)一種或多種BCAR與一種或多種Switch可以被裝在同一載體上，將多種載體混合而同時轉(zhuǎn)入TIL或pTIL細胞。