[發明專利]一種載EGCG的卵清蛋白納米粒子的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201810037343.3
• 申請日: 2018-01-16
• 公開（公告）號: CN108125928A
• 公開（公告）日: 2018-06-08
• 發明（設計）人: 肖波;茍雙全;陳秋冰;汪敏
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K31/353;A61K47/42;A61P1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種載表沒食子兒茶素沒食子酸酯（Epigallocatechin Gallate，EGCG）的卵清蛋白（ovalbumin,OVA）納米粒子的制備方法及其應用。首先通過加熱自組裝方法制備成功載EGCG的卵清蛋白納米粒子，然后對其進行了多項理化性質的表征。該種納米粒子具有較窄的粒徑分布，較高的載藥量（40±3μg/mg）以及良好的藥物控釋效果（24小時釋放50%）。本發明將具有天然抗炎性能的EGCG與卵清蛋白自組裝成納米粒子，從而降低了EGCG在到達病灶部位之前的氧化，改善了EGCG的藥代學特性，提高了其在體內的半衰期，增強了EGCG對潰瘍性結腸炎的治療效果。

技術領域

本發明屬于納米藥物載體技術領域，具體涉及一種載EGCG的卵清蛋白納米粒子制備方法、表征和應用。

背景技術

潰瘍性結腸炎（Ulcerative colitis, UC）是炎癥性腸病中最重要的一種，其病因可能包括環境、感染、免疫和遺傳等因素。攜帶某些特殊基因的人群可能更易患UC。據資料顯示，潰瘍性結腸炎在歐美國家發病率較高，以美國為例，發病率高達2‰。UC通常隨著時間推移，癥狀逐漸惡化。隨著國民生活水平的提高，UC在中國近年報道的病例也明顯增多，綜合多家醫院病例的統計推測，潰瘍性結腸炎的患病率為11.6/10萬，實際病例可能更多。UC已成為中國消化系統常見疾病和慢性腹瀉的主要原因，且患者多為青壯年，因此日益受到重視。

天然活性物質具有消炎、抗癌、抗氧化等生理活性，廣泛分布于多種植物，海洋生物和微生物中，目前天然活性物質的開發和研究已成為國內外藥品、食品研究和生命科學研究的熱點。本發明中所用到的EGCG即為從茶葉中提取的生物活性物質兒茶素的主要成分，但是天然活性物質也有不可避免的缺陷，大多數天然活性物質穩定性差，易被氧化，且易在堿性或酸性條件下分解，所以研究開發優良的藥物遞送系統非常必要。近幾年來，新穎的藥物遞送系統已經成為藥劑學領域研究的熱門，各種研究成果已被廣泛應用，其中納米載體藥物遞送系統則是新型藥物遞送系統研究的主流，而納米載體藥物遞送系統研究的重點是尋找或合成具有生物相容性好、可降解、低生物毒性等優良性能的載體材料。

因此，我們用卵清蛋白這個生物相容性好、低毒性、來源廣泛的球蛋白與具有良好抗炎性能的天然活性物質EGCG自組裝制備成為新型的藥物遞送體系，給UC治療提供一個切實可行的治療試劑。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種載EGCG的卵清蛋白納米粒子，其具有良好的生物相容性，穩定性，可用于潰瘍型結腸炎的治療，本發明的目的之二在于提供上述載EGCG的卵清蛋白納米粒子的制備方法。

為實現上述發明目的，技術方案為：

載EGCG的卵清蛋白納米粒子的制備方法包括以下步驟：

（1）稱取卵清蛋白（OVA）于50 mL的離心管中，然后加入pH 6.6的PBS緩沖液，渦旋充分溶解，水化過夜；

（2）將水化過夜的卵清蛋白溶液離心后收集上清液，除去不溶雜質；

（3）將步驟（2）中的所得的溶液在80℃水浴中保持20 min；

（4）將步驟（3）的溶液水浴結束后,往溶液中立刻加入EGCG，此時溶液變成乳濁液；

（5）將步驟（4）得到的含EGCG的乳濁液渦旋30 s，然后立刻用流水冷卻至室溫；

（6）將步驟（5）得到的乳濁液液立刻放入冰浴中，探頭超聲1 min;

（7）將步驟（6）得到的乳濁液液低度離心收集上清液；

（8）將步驟（7）得到的上清液再次進行離心后，棄去上清液，收集粒子；

（9）將步驟（8）收集的粒子重新懸浮在二次水，冷凍干燥后放入-20℃冰箱儲存備用。