[發明專利]一種與中國肥臀型綿羊“無尾”表型相關的分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201810037211.0
• 申請日: 2018-01-15
• 公開（公告）號: CN107988397B
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發明（設計）人: 韓吉龍;楊博輝;楊敏;劉建斌;郭婷婷;岳耀敬;牛春娥;袁超
• 申請（專利權）人: 石河子大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 62102 蘭州振華專利代理有限責任公司
• 代理人: 張晉

本發明公開一種用于檢測綿羊尾型性狀相關的單核苷酸的多態性標記SNPs及其應用。本發明用于檢測中國綿羊尾型性狀相關的單核苷酸的多態性標記SNPs，其特征在于所述SNPs標記位于綿羊8號染色體定位于87804590/87804589的兩個位點，該SNPs分子標記兩個位點完全連鎖，多態性為G?G和C?T，基因型為G?G/G?G；G?G/C?T；C?T/C?T三種，其中C?T/C?T基因型只在中國肥臀型綿羊中檢出，統計檢驗得出C?T/C?T基因型與綿羊“無尾”表型顯著相關。本發明可用于中國地方綿羊品種尾型性狀的早期選育，甚至胚胎期或者剛出生即可進行準確地篩選，該方法用于鑒定純種的中國肥臀型地方綿羊品種準確可靠，操作簡便的優點。

技術領域

本發明屬于遺傳生物學領域，涉及綿羊尾型相關的分子標記，具體與中國脂臀型綿羊無尾表型的T基因的單核苷酸的多態性（SNPs）分子標記及應用。

背景技術

為了適應不同的環境，綿羊經長期的自然選擇產生了個體表型差異較大的品種，尾型的差異就是進化過程中主要的變化之一。現代家養綿羊由摩弗倫羊及羱羊進化而來，但他們的尾型都為短瘦尾，經過幾千年的馴化尾型有長、短、肥、瘦的差異，依據尾巴長短和尾部脂肪體積大小可以將綿羊分為五大類型：短脂尾型如小尾寒羊、湖羊等；長脂尾型如廣靈大尾羊、蘭州大尾羊等；短瘦尾型如西藏羊、貴德黑裘皮羊等；長瘦尾型如甘肅高山細毛羊、新疆細毛羊等；肥臀尾型如哈薩克羊、阿勒泰羊等。綿羊的尾長由尾椎數和尾椎長度決定，而這一性狀受到生殖軸發育相關的基因的調控。以哈薩克系綿羊來源的肥臀型地方綿羊品種在我國新疆、甘肅等西北地區廣泛分布。肥臀型綿羊主要特點為臀部脂肪較多、尾椎發育不全、沒有明顯的尾巴。但是，國內外有關綿羊尾型的研究較少，目前還沒有發現相關基因的突變與肥臀型綿羊尾型相關的報道，尚無通過基因標記的方式來鑒定綿羊尾型的方法。因此，設計分子標記試劑盒來鑒定綿羊的尾型，尤其是哈薩克系綿羊的無尾表型，以確定其是否為純種羊具有重要意義和實用價值。

T基因為T-box轉錄因子家族成員，調控動物胚胎軸向生長的過程，進而對脊椎動物胚胎早期尾椎的發育和形成具有重要調控作用。前人研究發現，不同動物中該基因擁有多個可能影響尾椎發育相關的SNPs，且主要集中在該基因的T-box結構域中。T基因的突變已經被證實與牛、狗、貓、小鼠等動物的尾椎發育異常相關，且在狗、貓發現無尾性狀與T基因的T-box結構域的錯義突變相關。但是至今還沒有該基因的SNPs與我國肥臀型綿羊“無尾”表型相關的報道。

發明內容

本發明公開一種用于檢測綿羊尾型性狀相關的單核苷酸的多態性標記SNPs及其應用。

本發明用于檢測中國綿羊尾型性狀相關的單核苷酸的多態性標記SNPs，其特征在于所述SNPs標記位于綿羊8號染色體定位于87804590/87804589的兩個位點，該SNPs分子標記的多態性為G-G/C-T，兩個位點完全連鎖，基因型為G-G/G-G；G-G/C-T；C-T/C-T三種，其中C-T/ C-T只在中國肥臀型綿羊中檢出，說明C-T/C-T基因型與綿羊無尾表型相關。

本發明的用于鑒定綿羊肥臀型羊品種的方法是：

1）提取待測綿羊血液基因組DNA；

2）以待測綿羊的基因組DNA為模板，利用特異性引物進行PCR擴增反應，獲得擴增產物片段；

3）經測序檢測PCR擴增產物片段的8:87804590/8:87804589處的堿基種類，若堿基種類為C-T/C-T，則判定待測綿羊為肥臀型無尾性狀。

本發明用于鑒定綿羊肥臀型羊品種的方法使用的的特異性引物是SEQ ID No.1和SEQ ID No.2。

本發明的用于鑒定綿羊尾型性狀試劑盒中包括有特異引物SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2。