[發明專利]ABH人血型抗原的合成方法

在審

• 申請號: 201810036911.8
• 申請日: 2018-01-15
• 公開（公告）號: CN108251474A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 曹鴻志;李蕓;葉金鳳;劉長城
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12P19/18
• 分類號: C12P19/18
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 王志坤

1.一種ABH血型抗原的合成方法：包括利用“一鍋多酶”體系將巖藻糖以α1-2糖苷鍵偶聯到式(I)所示的二糖上，合成式(II)所示的三糖的步驟；利用“一鍋多酶”體系將半乳糖以α1-3糖苷鍵偶聯到式(II)所示的三糖上，合成式(III)所示的四糖的步驟；以及利用“一鍋多酶”體系將N-乙酰氨基半乳糖以α1-3糖苷鍵偶聯到式(II)所示的三糖上，合成式(IV)所示的四糖的步驟；

式(I)、式(II)、式(III)和式(IV)中，R1為羥基、疊氮取代烷基、炔基取代烷基、巰基取代烷基、α-或β-構型取代烷基、α-或β-構型絲氨酸殘基、α-或β-構型蘇氨酸殘基。

2.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，利用“一鍋多酶”體系合成式(II)所示的三糖的步驟中，先后用到的酶分別為：巖藻糖焦磷酸化酶和α1-2巖藻糖轉移酶。

3.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，利用“一鍋多酶”體系合成式(III)所示的四糖的步驟中，先后用到的酶分別為：半乳糖激酶、糖核苷生成酶以及α1-3半乳糖轉移酶。

4.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，利用“一鍋多酶”體系合成式(IV)所示的四糖的步驟中，先后用到的酶分別為：N-乙酰氨基葡萄糖激酶、糖核苷生成酶以及α1-3N-乙酰氨基半乳糖轉移酶。

5.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，式(I)所示的β-構型的乳糖化合物的合成方法為：將乳糖與醋酐進行反應后，將其全部裸露羥基用乙?；Ｗo；然后利用微波反應儀將全乙酰化的乳糖進行β-構型糖苷化反應，然后依次疊氮化和脫保護后即得。

6.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，式(II)所示的三糖化合物合成方法為：將式(I)所示的β-構型的乳糖化合物、1.3-3.0當量巖藻糖、1.3-5.0當量腺嘌呤核苷三磷酸、1.3-5.0當量鳥嘌呤核苷三磷酸、5-100mmo MgCl₂、10-500mmol、pH 5.0-10.0Tris-HCl緩沖液配制水溶液，然后將反應體系的pH值調節至4.5-8.5，然后添加鳥苷二磷酸巖藻糖焦磷酸化酶和α1-2巖藻糖轉移酶，反應時間為3-72小時，待反應完成后，純化即可直接獲得式(II)所示的三糖化合物。

7.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，式(III)所示的B抗原四糖化合物的合成方法為：將式(II)所示的三糖化合物、1.3-3.0當量半乳糖、1.3-5.0當量腺嘌呤核苷三磷酸、1.3-5.0當量尿嘧啶核苷三磷酸、5-100mmol MgCl₂、10-500mmol、pH 5.0-10.0Tris-HCl緩沖液配制水溶液，然后將反應體系的pH值調節至4.5-8.5，然后添加半乳糖激酶、糖核苷生成酶以及α1-3半乳糖轉移酶，反應時間為3-72小時，待反應完成后，純化即可直接獲得式(III)所示四糖化合物。

8.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，式(IV)所示的四糖化合物的合成方法為：將式(II)所示的三糖化合物2、1.3-3.0當量N-乙酰氨基半乳糖、1.3-5.0當量腺嘌呤核苷三磷酸、1.3-5.0當量尿嘧啶核苷三磷酸、5-100mmol MgCl₂、10-500mmol、pH 5.0-10.0Tris-HCl緩沖液配制水溶液，然后將反應體系的pH值調節至4.5-8.5，然后添加N-乙酰氨基半乳糖激酶、UDP-N-乙酰氨基半乳糖合成酶以及α1-3N-乙酰氨基半乳糖轉移酶，反應時間為3-72小時，待反應完成后，純化即可直接獲得式(IV)所示的四糖化合物。

9.如權利要求6-8任一項所述的合成方法，其特征在于，反應完成后采用薄層色譜法跟蹤反應進程，展開劑為EA:CH₃OH:H₂O:HOAc＝4:2:1:0.2來檢測。

10.如權利要求6-8任一項所述的合成方法，其特征在于，合成式(II)、式(III)和式(IV)所示的多糖所采用的“一鍋多酶”體系中，反應溫度為0-37℃，轉速為0-240r/min；酶反應的停止方法是向反應中加入與反應液等體積的4℃無水乙醇并在4℃下孵育0-50分鐘。