[發明專利]基于核酸適配體結構開關檢測卡那霉素

在審

• 申請號: 201810036906.7
• 申請日: 2018-01-15
• 公開（公告）號: CN108318692A
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 喬尚娜;張鳴鏑;孫春燕;黃楚君;耿永興;劉秋麗;沈旭
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58
• 代理公司: 長春市恒譽專利代理事務所(普通合伙) 22212
• 代理人: 李榮武

1.基于核酸適配體結構開關檢測卡那霉素，其特征是利用核酸適配體的特異性識別和熒光共振能量轉移技術的優勢來檢測卡那霉素的殘留量，包括以下步驟：建立基于核酸適配體的結構開關檢測卡那霉素；通過測定熒光光譜圖測定所建立的核酸適配體結構開關對卡那霉素的選擇性；運用所建立的核酸適配體的結構開關測定實際樣品中的卡那霉素。

2.如權利要求1所述的基于核酸適配體結構開關檢測卡那霉素，其中基于核酸適配體的結構開關檢測卡那霉素的步驟如下：向含有0.5μM核酸適配體50μL，1μM互補鏈50μL，PH8.0 Tris-HCl緩沖溶液350μL的混合體系中，分別加入不同濃度的卡那霉素標準溶液，室溫條件下反應20min后，測定該體系的熒光強度，其熒光信號值將隨著卡那霉素濃度的不同而發生變化，根據F₂-F₁與卡那霉素的濃度建立標準曲線，卡那霉素的檢出限為12.01nM，線性范圍為100-700nM。

3.如權利要求1所述的基于核酸適配體結構開關檢測卡那霉素，其中通過測定熒光光譜圖測定所建立的核酸適配體結構開關對卡那霉素的選擇性的步驟如下：選擇實際樣品中易出現殘留的與卡那霉素相似的抗生素進行了選擇性實驗，分別為鏈霉素、氯霉素、四環素、土霉素、環丙沙星；首先，分別將卡那霉素、鏈霉素、氯霉素、四環素、土霉素、環丙沙星的標準溶液稀釋到5μM；其次，將上述5μM抗生素溶液各吸取50μL分別加入到含有0.5μM核酸適配體50μL，1μM互補鏈50μL，PH8.0 Tris-HCl緩沖溶液350μL的體系中，渦旋混合20min后測定熒光值，結果顯示只有加入卡那霉素的體系出現熒光恢復的情況，說明該結構開關體系對于實際樣品中卡那霉素的檢測具有較好的選擇性。

4.如權利要求1所述的基于核酸適配體結構開關檢測卡那霉素，其中運用所建立的核酸適配體的結構開關測定實際樣品中的卡那霉素的步驟如下：取4mL的牛奶加入到15mL的離心管中，加入6mL的三重蒸餾水進行稀釋后加入2mL10％的三氯乙酸和2mL氯仿，渦旋混合1min后，在溫度為20℃的條件下超聲15min；然后，將上述溶液以13000轉/分鐘的轉速離心10min，吸取上清液轉移至另一個15mL的離心管中，再以10000r/min的轉速離心10min，吸取上清液，稀釋20倍后備用；然后，加入不同濃度的卡那霉素標準溶液，按照權利要求2所述的方法，進行測定；根據F₂-F₁與卡那霉素的濃度建立工作曲線，卡那霉素的檢出限為13.07nM，線性范圍為100-600nM。