[發明專利]一種基于CRISPRi的共利用葡萄糖和木糖生產N-乙酰氨糖的方法

有效

• 申請號: 201810036701.9
• 申請日: 2018-01-15
• 公開（公告）號: CN108148797B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 劉龍;陳堅;堵國成;李江華;武耀康;陳泰馳
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/75;C12N15/90;C12P19/26;C12R1/125
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種基因工程菌，其特征在于，能夠共利用葡萄糖和木糖生產N-乙酰氨基葡萄糖；所述共利用葡萄糖和木糖生產N-乙酰氨基葡萄糖是利用dCas9蛋白和sgRNA調控糖酵解、磷酸戊糖及肽聚糖合成三條途徑中的zwf，pfkA與glmM基因實現的；所述基因工程菌以枯草芽孢桿菌BSGNY-Pveg-glmS-P43-GNA1為出發菌株。

2.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，基因工程菌整合表達了dCas9蛋白，并整合了三個分別作用于zwf，pfkA與glmM基因的sgRNA表達片段。

3.根據權利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述dCas9蛋白通過載體pLCx進行整合表達。

4.權利要求3所述基因工程菌的構建方法，其特征在于，以所述枯草芽孢桿菌為出發菌株，以載體pLCx將d Cas9蛋白整合表達，并將作用于zwf，pfkA與glmM基因的sgRNA表達片段用載體psga整合表達。

5.一種共利用葡萄糖與木糖生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，將權利要求1～2任一所述的基因工程菌接種入發酵培養基，發酵生產N-乙酰氨基葡萄糖。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述發酵培養基含有葡萄糖和木糖，或含有能夠水解為葡萄糖和木糖的原料。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法是將重組枯草芽孢桿菌接種入含葡萄糖的發酵培養基，在3-9h內添加濃度為5-20g/L的木糖。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法是將生產菌株活化后，以5-10％的接種量轉入發酵培養基，35-38℃、150-250rpm條件下培養24-60h。

9.權利要求1所述的基因工程菌在食品、日化領域或制備藥物、保健品方面的應用。