[發(fā)明專利]一種雜交瘤細胞株、創(chuàng)傷弧菌膜蛋白單克隆抗體和創(chuàng)傷弧菌檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810035730.3
• 申請日: 2018-01-15
• 公開（公告）號: CN108251379B
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許斌福;龔暉;池洪樹;鄭在予;方冬蘭;黃河
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/12;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

本發(fā)明提供了一種雜交瘤細胞株、創(chuàng)傷弧菌膜蛋白單克隆抗體和靈敏度高、特異性好的創(chuàng)傷弧菌檢測試劑盒，屬于創(chuàng)傷弧菌免疫檢測領(lǐng)域。所述雜交瘤細胞株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:C2016146。所述創(chuàng)傷弧菌檢測試劑盒包括以下組分：酶標板、創(chuàng)傷弧菌膜蛋白IgG單克隆抗體、HRP酶標記鼠抗、封閉液、抗體稀釋液、洗滌液、顯色液、終止液、陽性對照品和空白對照品。本發(fā)明提供的創(chuàng)傷弧菌檢測試劑盒能夠特異性檢測創(chuàng)傷弧菌，靈敏度高，對創(chuàng)傷弧菌膜蛋白樣品的最低檢測限為78ng。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于創(chuàng)傷弧菌疾病特異性檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雜交瘤細胞株、創(chuàng)傷弧菌膜蛋白單克隆抗體和創(chuàng)傷弧菌檢測試劑盒。

背景技術(shù)

創(chuàng)傷弧菌是公認的人魚共患病的條件致病菌，對近海和河口環(huán)境的鰻魚、黃姑魚、牡蠣、大菱鲆、石斑魚等水產(chǎn)名貴經(jīng)濟動物以及養(yǎng)殖從業(yè)人員危害大，該菌分為生物I型、生物II型、生物III型3個生物型，一般感染創(chuàng)傷弧菌生物I型的病人致死率高達60％以上；創(chuàng)傷弧菌生物II型主要感染鰻鱺等咸淡水養(yǎng)殖品種，導(dǎo)致感染魚大量死亡，造成嚴重經(jīng)濟損失。因此，創(chuàng)傷弧菌疾病的診斷與預(yù)防尤為重要和關(guān)鍵，目前創(chuàng)傷弧菌病還缺乏快速、準確的診斷方法和免疫監(jiān)測手段。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種雜交瘤細胞株、創(chuàng)傷弧菌膜蛋白單克隆抗體和靈敏度高、特異性好的創(chuàng)傷弧菌檢測試劑盒，所述試劑盒可應(yīng)用于創(chuàng)傷弧菌病疫苗免疫效果評價、免疫應(yīng)答水平監(jiān)測，以及水產(chǎn)動物創(chuàng)傷弧菌病的快速診斷。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:C2016146。

本發(fā)明還提供了一種創(chuàng)傷弧菌膜蛋白IgG單克隆抗體，所述單克隆抗體由上述的雜交瘤細胞株分泌產(chǎn)生。

本發(fā)明還提供了一種創(chuàng)傷弧菌檢測試劑盒，包括以下組分：酶標板、創(chuàng)傷弧菌膜蛋白IgG單克隆抗體、HRP酶標記鼠抗、封閉液、抗體稀釋液、洗滌液、顯色液、終止液、陽性對照品和空白對照品。

優(yōu)選的，所述創(chuàng)傷弧菌膜蛋白IgG單克隆抗體腹水效價大于1：128000。

優(yōu)選的，所述抗體稀釋液為質(zhì)量濃度0.8～1.2％的BSA-PBST溶液。

優(yōu)選的，所述抗體稀釋液的pH值為7.1～7.3。

優(yōu)選的，所述封閉液為質(zhì)量濃度1.6～2.4％的BSA-PBST溶液。

優(yōu)選的，所述的洗滌液為PBST溶液；所述洗滌液的pH值為7.0～7.4。

優(yōu)選的，所述顯色液包括底物顯色A液和底物顯色B液；所述底物顯色 A液包括26～28g/L的醋酸鈉，3.0～3.5g/L的檸檬酸，0.5～0.7ml/L30wt％的雙氧水；所述底物顯色B液包括0.35～0.45g/L的乙二胺四乙酸二鈉，1.8～2.0g/L的檸檬酸，90～110ml/L的甘油，0.28～0.32g/L的四甲基聯(lián)苯胺；在使用所述顯色液前將等體積的底物顯色A液和底物顯色B液混勻。

優(yōu)選的，所述終止液為質(zhì)量濃度0.10～0.11％的硫酸溶液。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供的雜交瘤細胞株能夠分泌產(chǎn)生創(chuàng)傷弧菌膜蛋白IgG單克隆抗體，所述創(chuàng)傷弧菌膜蛋白IgG單克隆抗體的效價高，腹水效價大于1：128000；采用該單克隆抗體，酶標板、HRP酶標記鼠抗、封閉液、抗體稀釋液、洗滌液、顯色液、終止液、陽性對照品和空白對照品組成一種創(chuàng)傷弧菌檢測試劑盒，該試劑盒能夠特異性檢測創(chuàng)傷弧菌，靈敏度高，對創(chuàng)傷弧菌膜蛋白樣品的最低檢測限為78ng。

附圖說明

圖1為實施例1中創(chuàng)傷弧菌膜蛋白的分離純化SDS-PAGE電泳圖；