[發明專利]提高NK細胞靶向作用力的方法及CCR5基因的應用有效
| 申請號： | 201810034508.1 | 申請日： | 2018-01-15 |
| 公開（公告）號： | CN109609553B | 公開（公告）日： | 2022-06-24 |
| 發明（設計）人： | 盛譽喬;李峰 | 申請（專利權）人： | 鄭州大學第一附屬醫院 |
| 主分類號： | C12N15/867 | 分類號： | C12N15/867;C12N7/00;C12N5/10;C12R1/93 |
| 代理公司： | 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 高姍 |
| 地址： | 450052 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 提高 nk 細胞 靶向 作用力 方法 ccr5 基因 應用 | ||
1.過表達CCR5基因的NK細胞在制備治療結腸癌藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的過表達CCR5基因的NK細胞在制備治療結腸癌藥物中的應用，其特征在于：所述CCR5基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根據權利要求1或2所述的過表達CCR5基因的NK細胞在制備治療結腸癌藥物中的應用，其特征在于：在NK細胞中轉導入CCR5基因。
4.根據權利要求3所述的過表達CCR5基因的NK細胞在制備治療結腸癌藥物中的應用，其特征在于：在NK細胞中轉導入CCR5基因具體包括以下步驟：
（1）獲取CCR5編碼序列：利用Trizol試劑提取人外周血單核細胞的總RNA后，將其反轉錄成cDNA，PCR擴增獲得CCR5的編碼序列，上游引物序列：5’-
（2）重組質粒構建：將慢病毒質粒pCDH-EF1-MSC-T2A-conGFP與CCR5編碼序列PCR產物分別用BamHI和NotI進行雙酶切，酶切產物電泳鑒定后，利用快速連接酶連接，得表達人CCR5的慢病毒載體pCDH-EF1-CCR5-T2A-conGFP；
（3）病毒包裝：將pCDH-EF1-CCR5-T2A-conGFP質粒與包裝質粒混合，利用磷酸鈣轉染試劑進行293T細胞轉染；
（4）NK細胞感染：將收集的293T細胞轉染上清液與活化的NK細胞及polybrene孵育，得感染的NK細胞。
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