[發明專利]一種殼寡糖接枝共聚物G2.0及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810033465.5
• 申請日: 2018-01-14
• 公開（公告）號: CN108440763B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 熊春華;曹彥美;閻亞利;王小青;王彥波;修麗麗;方城旭
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: C08G83/00
• 分類號: C08G83/00;C08B37/08;A23L3/3562
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 冉國政

1.一種殼寡糖接枝共聚物G2.0，其特征在于其分子式如下：

其中n為任意整數值； 其具體的制備方法如下：

1)稱取一定量的殼聚糖通過高速攪拌使其充分溶解于一定量的1％(v/v)乙酸溶液中，然后將溶液轉移至石英三頸瓶內，添加一定量的30％(v/v)H₂O₂,正確安裝于微波合成儀腔體內，注意一定要使超聲波探頭沒到溶液的界面以下；設置微波功率300w，反應30min,打開紫外燈光照進行輔助降解，待實驗結束，將溶液在40℃度下水浴旋蒸濃縮，然后進行冷凍干燥24h，即可得到粘均分子量M_η在25000左右的殼低聚糖樣品；上述乙酸加入量與殼聚糖的總量關系如下：每3g殼聚糖加入100mL上述乙酸溶液，H₂O₂加入量與殼聚糖的總量關系如下：每1g殼聚糖加入0.1mL30％H₂O₂；

2)按照質量比為1：1：1的比例稱取一定量的木瓜蛋白酶、果膠酶和纖維素酶溶于pH＝5.5的HAC-NaAC的緩沖溶液中，配制成1mg/mL的酶液，待用；將上述經微波降解后的殼低聚糖溶液的pH調節至5.5，按照酶與底物的濃度之比為1：10，加入上述待用酶液，攪拌均勻，并置于45℃的恒溫水浴槽中酶解4h；完成后煮沸加熱10min使酶滅活，40℃下減壓蒸餾濃縮得到制備所需的反應原料殼寡糖樣品溶液；

3)反應原料殼寡糖的制備步驟還包括對制備所得的殼寡糖粉末進行分子量分級，選取分子量為3500-7000的殼寡糖作為原料；具體分級方法如下：分別選取直徑為25mm截留分子量7000和直徑34mm截留分子量為3500的透析袋進行前處理，去除金屬離子；將直徑較小的透析袋套入直徑較大的透析袋中，其中一端用透析袋夾固定，蒸餾水沖洗干凈，然后用5mL的移液槍移取步驟 2 ） 制備的殼寡糖樣品溶液裝入里層透析袋內，蒸餾水填充雙層透析袋之間的間隙，透析袋夾封口，然后放入裝有蒸餾水的大燒杯中透析5d；透析完成后將雙層膜間隙的液體取出，冷凍干燥，即可得到特定分子量的反應原料殼寡糖；

4)稱取一定量的殼寡糖，加入1％(v/v)乙酸作為反應溶劑；乙酸加入量與殼寡糖的總量關系如下：每1g殼寡糖中加入上述乙酸25ml；充分溶解，向瓶內通入氮氣移除氧氣；在氮氣保護下加入一定量的硝酸鈰銨作為引發劑，引發劑的加入量與殼寡糖的質量比為1.6:1-2.5:1；然后緩慢地逐滴加入適量丙烯酸甲酯；上述殼寡糖和丙烯酸甲酯的反應摩爾比為1：8—1：8.5；設置攪拌速度為200rpm,40℃—55℃溫度下連續反應8h—10h；待反應完成后，將反應所得物G0.5濾出，接著將濾出的反應所得物G0.5先用反應溶劑1％(v/v)乙酸抽濾3次，再依次丙酮、乙醚、無水乙醇反復沖洗3次，除去未反應的丙烯酸甲酯，最后放入50℃真空干燥箱烘干備用；

5)稱取上述步驟制得備用的G0.5，加入色譜級的甲醇溶劑浸泡12h，甲醇的加入量與G0.5的總量關系如下：每1mg G0.5中加入上述甲醇0.5ml；控制反應溫度為20℃，逐滴加入分析純乙二胺：乙二胺的加入量與G0.5的總量關系如下：每1mg G0.5加入乙二胺0.08mL；N₂保護下反應8h；待反應完成后，將反應所得物G1.0濾出，用反應溶劑甲醇沖洗3遍，然后再依次用無水乙醇、蒸餾水反復洗滌3次，置于50℃真空干燥備用；

6)稱取步驟5)所得G1.0置于三頸燒瓶中，加入色譜級甲醇溶劑浸泡12h，甲醇的加入量與G1.0的總量關系如下：每1mg G1.0中加入上述甲醇0.4ml；然后在氮氣保護下逐滴加入丙烯酸甲酯，丙烯酸甲酯的加入量與G1.0的總量關系如下：每1mg G1.0中加入上述丙烯酸甲酯0.1ml；在45℃下連續反應8h后，濾出G1.5，按照G0.5的洗滌方法純化樣品，置于50℃真空干燥箱干燥備用；

7)稱取上述步驟制得備用的G1.5，加入色譜級甲醇溶劑浸泡12h，甲醇的加入量與G1.5的總量關系如下：每1mg G1.5中加入上述甲醇0.5ml；控制反應溫度為20℃，逐滴加入分析純乙二胺：乙二胺的加入量與G1.5的總量關系如下：每1mg G1.5加入乙二胺0.08mL；N₂保護下反應8h；待反應完成后，將反應所得物G2.0濾出，用反應溶劑甲醇沖洗3遍，然后再依次用無水乙醇、蒸餾水反復洗滌3次，置于50℃真空干燥即得。