[發(fā)明專利]一種抑制WSSV早期感染的基因Cq-VCP及其制備與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810032401.3
• 申請日: 2018-01-12
• 公開（公告）號: CN108018289B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉海鵬;孟闖;劉靈珂;范維維;李成華;王克堅
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C07K14/435;A61K38/17;A61P31/20
• 代理公司: 廈門創(chuàng)象知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35232
• 代理人: 尤懷成

一種抑制WSSV早期感染的基因Cq?VCP及其制備與應(yīng)用，涉及白斑綜合征病毒。所述紅螯螯蝦含纈酪肽蛋白命名為Cq?VCP。將Cq?VCP基因連接到載體pMD18?T，并分析其開放閱讀框，得Cq?VCP基因序列；所得的Cq?VCP基因序列進(jìn)行進(jìn)化樹分析并分析其蛋白結(jié)構(gòu)域。所述紅螯螯蝦含纈酪肽蛋白可在制備抗WSSV感染藥物中應(yīng)用。涉及新的基因及其蛋白功能，即紅螯螯蝦VCP基因擴(kuò)增及其功能驗證。在WSSV感染宿主細(xì)胞過程中，Cq?VCP能夠調(diào)控病毒的早期入胞及隨后的囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)過程。Cq?VCP調(diào)控WSSV早期感染階段，對于作為病毒入侵細(xì)胞靶點(diǎn)設(shè)計抗白斑綜合征病害有效藥物防治具有重要應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及白斑綜合征病毒，尤其是涉及WSSV感染過程中宿主細(xì)胞對其入胞及胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過程發(fā)揮調(diào)控作用的一種抑制WSSV早期感染的基因Cq-VCP及其制備與應(yīng)用。

背景技術(shù)

白斑綜合征病毒(White spot syndrome virus，WSSV)是對蝦和螯蝦等重要甲殼類養(yǎng)殖業(yè)最具毀滅性的病毒性病原之一，能夠引起大規(guī)模白斑綜合征病害暴發(fā)和被感染動物的高死亡率，對水產(chǎn)甲殼動物養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)造成極大的危害，迄今為止，依然缺乏有效的藥物治療或預(yù)防手段。

含纈酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)是高度保守的三磷酸腺苷酶超家族(ATPases associated with various cellular activities，AAA)中的一員^[1]，參與多種細(xì)胞活性調(diào)控，包括泛素-蛋白酶體依賴的蛋白降解、膜融合、抗細(xì)胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解和核酸修復(fù)等^[2]。VCP在細(xì)胞內(nèi)的多種生物學(xué)功能的實現(xiàn)主要依賴于與其結(jié)合的各種輔因子以及與其互作的適配蛋白^[3]。與VCP結(jié)合的輔因子主要分為底物募集輔因子和底物加工輔因子，前者包括Ufd1-Npl4異源二聚體、Shp1/p47和Derlin-1等；后者主要包括VCIP135和SVIP等。

WSSV是雙鏈DNA病毒，DNA病毒的感染過程，一般分為黏附、入胞、胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)、病毒核酸入核與轉(zhuǎn)錄復(fù)制、子代病毒組裝及成熟過程^[4]。在病毒早期入侵宿主細(xì)胞的內(nèi)吞途徑中，VCP通過連接網(wǎng)格蛋白clathrin和接頭蛋白Aps，參與網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞過程^[5]，之前研究報道已驗證網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞過程正是WSSV感染宿主細(xì)胞的關(guān)鍵主要途徑^[6]。在胞內(nèi)內(nèi)體轉(zhuǎn)運(yùn)過程中，VCP與輔因子UBXD1結(jié)合，促進(jìn)泛素化的蛋白分選及降解。而VCP功能障礙可致使晚期內(nèi)體聚集，影響管腔內(nèi)的底物分選，及隨后的囊泡與溶酶體融合降解^[7]。在冠狀病毒早期感染中，藥物抑制VCP功能，能夠抑制轉(zhuǎn)運(yùn)病毒的內(nèi)體成熟從而抑制其釋放出來^[8]。庫蚊傳播的辛德畢斯病毒(Sindbis virus)可感染果蠅和哺乳動物細(xì)胞。基因敲降或藥物抑制VCP功能，能影響病毒早期入胞并改變病毒受體的囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)途徑^[9]。另外VCP在poliovirus^[10]、hepatitis B virus^[11]等病毒的感染過程也發(fā)揮一定作用。

參考文獻(xiàn)：

1.Erzberger J P,Berger J M.Evolutionary relationships and structuralmechanisms of AAA+proteins[J].Annual Review of BiophysicsBiomolecularStructure,2006,35(1):93.

2.Meyer H,Bug M,Bremer S.Emerging functions of the VCP/p97AAA-ATPasein the ubiquitin system.[J].Nature Cell Biology,2012,14(2):117.