[發明專利]一種乙肝疫苗接種后免疫應答的檢測方法

在審

• 申請號: 201810031930.1
• 申請日: 2018-01-12
• 公開（公告）號: CN107957496A
• 公開（公告）日: 2018-04-24
• 發明（設計）人: 余祖衛;李玉蓮;許曉佳
• 申請（專利權）人: 東莞市大朗鎮社區衛生服務中心
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576;G01N15/14
• 代理公司: 東莞市華南專利商標事務所有限公司44215
• 代理人: 張明

1.一種乙肝疫苗接種后免疫應答的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)接種對象的選取：結合常規免疫規劃工作，在乙肝疫苗接種人群中招募志愿者，詢問相關信息，選取合適乙肝疫苗接種對象；

2)采集血液樣本：對符合標準的乙肝疫苗接種對象，采用靜脈采血方式采集乙肝疫苗接種對象血液樣本；

3)處理血液樣本：從步驟2)的血液樣本中分離出血漿和淋巴細胞，采用ELISA法檢測血漿中HBsAb水平；使用淋巴細胞分離液以密度梯度離心法分離外周血單個核細胞，采用流式細胞術檢測Tfh細胞數；

4)乙肝疫苗的接種：向接種對象注射乙肝疫苗；

5)血液樣本的采集與處理：

5.1)7天后采集其血液樣本，從采集的血液樣本中分離出血漿和淋巴細胞，采用ELISA法檢測血漿中HBsAb水平；使用淋巴細胞分離液以密度梯度離心法分離外周血單個核細胞，采用流式細胞術檢測Tfh細胞數；

5.2)14天后再采集其血液樣本，從采集的血液樣本中分離出血漿和淋巴細胞，采用ELISA法檢測血漿中HBsAb水平；使用淋巴細胞分離液以密度梯度離心法分離外周血單個核細胞，采用流式細胞術檢測Tfh細胞數。

2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：

所述接種對象的選取的標準為：1)完成3針乙肝疫苗接種程序；2)最近1年內未接種過乙肝疫苗；3)既往未感染乙肝病毒；4)無基礎性疾病；5)愿意全程參與實驗，并服從實驗安排；6)對疫苗不存在過敏反應；7)實驗期間未發生感染性疾病。

3.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：

所述靜脈采血的步驟包括以下步驟：

(1)確定采血時間：編號研究對象，根據實驗對象乙肝疫苗接種時間，預約安排采血時間；

(2)采血前準備：在采血管上貼好標簽，填寫采血者編號和采血次數；穿戴好工作服，消毒洗手，戴上手套與口罩；

(3)選擇采血靜脈：要求被采血者坐在實驗臺前，面對采血者，手平放在桌面，掌心向上，肘部墊一枕墊。采血部分常選擇肘前靜脈，備選于手背部靜脈；

(4)扎壓脈帶，消毒皮膚：在肘窩上8cm處系上壓脈帶，要求被采血者緊握和放松拳頭幾次，使得靜脈顯現。用碘伏棉簽消毒采血部位，再用75wt％酒精棉簽擦拭消毒部位；

(5)采血與止血：打開一次性靜脈采血針包裝，取出采血針，以45°斜刺進皮膚，進入靜脈內時有刺空感，見有少量回血后將采血針的另一端插入真空采血管內，每管到達采血8mL，每個人每次共采3管；采血完畢，用棉簽按住采血針頭部位，快速拔出針頭，要求被采血者按住棉簽不少于3分鐘。

4.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述分離出血漿的方式為：將采集的血液樣本在采血管靜置30分鐘，待有血漿析出，每管收集200μL血漿，在-80℃下保存。