[發明專利]一株產殼聚糖酶的枯草芽孢桿菌及其應用

在審

• 申請號: 201810030676.3
• 申請日: 2018-01-12
• 公開（公告）號: CN108018245A
• 公開（公告）日: 2018-05-11
• 發明（設計）人: 王剛剛;茍艷;謝天;劉忠川
• 申請（專利權）人: 中國科學院成都生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/42;C12P19/26;C12P19/14;C12R1/125
• 代理公司: 成都坤倫厚樸專利代理事務所(普通合伙) 51247
• 代理人: 劉坤

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一株產殼聚糖酶枯草芽孢桿菌及其應用。本發明提供的枯草芽孢桿菌，其所產的殼聚糖酶產量高、酶活力強，具有與普通殼聚糖酶不同的蛋白結構，為殼聚糖酶分子機構的深入研究提供了新思路。普通的殼聚糖酶只在弱堿性至弱酸性時具有較好的活性，而本發明發現的殼聚糖酶在弱堿性、中性、弱酸性和較強酸性條件下均具有較好活性。同時，本發明發現的殼聚糖酶，不僅可作用于能夠溶解的殼聚糖，還可作用于不可溶的高聚殼聚糖，省略了殼聚糖降解前的處理；反應終產物為二聚氨基葡萄糖和三聚氨基葡萄糖，成分簡單，便于后續進一步加工應用，極大地節省了生產成本。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一株產殼聚糖酶的枯草芽孢桿菌及其應用。

背景技術

氨基葡萄糖是重要的醫藥前體和化工原料,具有廣泛的用途。蝦蟹殼來源的殼聚糖(Chitosan)是由D-氨基葡萄糖(或少量N-乙酰-D-氨基葡萄糖)通過β-1,4-糖苷鍵連接形成的聚合物,全球每年產生的殼聚糖超過1000億噸,通過水解殼聚糖可以生產大量的氨基葡萄糖。

目前，常用的殼聚糖水解方法分別有：酸法水解、氧化降解、物理降解法和酶法水解。其中酶法降解殼聚糖具有環境污染低、反應條件溫和、無副產物等優點，是目前應用前景最廣的殼聚糖降解方法，近年來已經逐漸用于工業化生產，而酶法水解殼聚糖的關鍵在于殼聚糖酶。

盡管酶法制備殼寡糖存在許多優勢，但現有的殼聚糖酶普遍存在：適用的pH范圍狹窄、只能作用于可溶解殼聚糖、降解產物多為五糖(G5)至以上的寡糖等問題。如一篇名為“微生物殼聚糖酶的研究概況”的報道中提出：現有的各類殼聚糖酶，多數為堿性蛋白，最適pH普遍集中在5～8之間，偶有幾個酶的最適pH為4，但其對應的最適溫度偏高，造成在實際生產應用中能耗較高、適用范圍不廣的情況。

因此，開發一種適宜pH范圍廣、最適溫度相對偏低、可將不可溶殼聚糖降解為二糖(G2)、三糖(G3)等低聚糖的殼聚糖酶，可有效推動海洋蝦蟹來源殼聚糖的深度利用，具有重要的現實意義。

發明內容

本發明的目的是提供一株產殼聚糖酶的枯草芽孢桿菌及其應用。

為實現上述發明目的，本發明所采用的技術方案是：一株枯草芽孢桿菌，2017年10月30日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,菌種名稱:枯草芽孢桿菌，Bacillus subtilis，MY002，保藏編號為CGMCC No.14841。

相應的，一株枯草芽孢桿菌，其16SrDNA測序結果如SEQ ID NO 1所示；其gyrA測序結果如測序結果如SEQ ID NO 2所示；其gyrB測序結果如SEQ ID NO 3所示。

相應的，所述枯草芽孢桿菌在水解殼聚糖中的應用。

優選的，所述應用的pH范圍為2.5～7.5。

優選的，所述應用的pH為：3或6。

優選的，所述應用的溫度范圍為35～65℃。

相應的，一種殼聚糖酶CsnMY002，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO 4所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO 5所示。

相應的，所述殼聚糖酶CsnMY002在水解殼聚糖中的應用。

優選的，所述應用的pH范圍為：2.5～7.5。

優選的，所述應用的溫度為35～65℃。

本發明具有以下有益效果：

1、本發明提供了一株產殼聚糖酶的枯草芽孢桿菌，其所產的殼聚糖酶具有產量高、酶活力強等優點。