[發明專利]血液破壁生長因子的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201810029948.8
• 申請日: 2018-01-12
• 公開（公告）號: CN110028571A
• 公開（公告）日: 2019-07-19
• 發明（設計）人: 詹華強;陳嘉倫;董婷霞;馮晞瑤;潘嘉敏
• 申請（專利權）人: 香港科技大學
• 主分類號: C07K14/475
• 分類號: C07K14/475;C07K14/485;C07K14/49;C07K1/34;C07K1/14;A61K8/64;A61Q19/00;A61Q19/02;A61Q19/08
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

本申請提供了血液破壁生長因子的制備方法及其應用。通過本申請提供的制備方法獲得的非人類血液破壁生長因子，具有較高產量及市場化價值，主要應用于皮膚再、皮膚美白或皮膚抗氧化/抗衰老等。

技術領域

本申請屬于生物技術領域，涉及血液破壁生長因子的制備方法及其應用。

背景技術

生長因子是天然存在于體內的蛋白質，有刺激和增強細胞生長和組織修復的能力。血液中的血小板儲存著大量具活性的生長因子。

目前用于傷口愈合及運動創傷大部分采用血液高濃度血小板血漿，即PRP。然而，從患者中提取的PRP必須是使用新鮮的，不能長時間儲存。血小板的平均壽命通常只有在提取后的5至9天，然而正常的PRP治療程序需要進行為期3至6個月。通常，每次接收PRP之前治療時，患者必須經受靜脈穿刺等待30分鐘以上為了提取PRP。因此，將PRP中生長因子的保質期延長能讓治療過程中避免多次抽血，節省醫生和病人的時間和勞動，并降低PRP生產成本。

發明內容

一方面，本申請提供了血液破壁生長因子的制備方法，其包括以下步驟：分離血液，以獲得高濃度血小板血漿；以及裂解高濃度血小板血漿，以獲得生長因子提取液。

在一實施方案中，本申請提供的血液破壁生長因子的制備方法包括以下步驟：分離血液，以獲得高濃度血小板血漿；裂解高濃度血小板血漿，以獲得生長因子提取液；以及過濾生長因子提取液，以去除污染物。

在另一實施方案中，本申請提供的血液破壁生長因子的制備方法包括以下步驟：分離血液，以獲得高濃度血小板血漿；裂解高濃度血小板血漿，以獲得生長因子提取液；過濾生長因子提取液，以去除污染物；以及冷凍干燥經過濾的生長因子提取液。

在另一實施方案中，本申請所提供的制備方法還包括在所獲得的高濃度血小板血漿中加入緩沖劑以使其pH值穩定的步驟。在具體實施方案中，所述緩沖劑為HEPES、磷酸緩沖鹽溶液(PBS)或是生理鹽水等。

在一實施方案中，所述制備方法中分離血液的步驟通過離心來實現。在具體實施方案中，所述離心條件如下：800-2300克/分鐘。在另一具體實施方案中，所述離心進行3次。

在一實施方案中，所述制備方法中裂解高濃度血小板血漿的步驟通過冷凍/重溶、超聲或研磨來實現。在具體實施方案中，所述冷凍/重溶條件如下：-50℃至-60℃冷凍20-30分鐘，35℃至40℃重溶5-15分鐘。在另一具體實施方案中，所述冷凍/重溶進行至少2次。在另一具體實施方案中，所述超聲條件如下：185W，40kHz超聲10-20分鐘。

在具體實施方案中，本申請所提供的破壁生長因子的制備方法，其包括以下步驟：血液以800-2300克/分鐘離心3次，獲得高濃度血小板血漿；以及高濃度血小板血漿通過至少2次冷凍/重溶，或者至少10分鐘超聲裂解，獲得生長因子提取液。

在另一具體實施方案中，本申請所提供的破壁生長因子的制備方法，其包括以下步驟：血液以800-2300克/分鐘離心3次，獲得高濃度血小板血漿；高濃度血小板血漿通過至少2次冷凍/重溶，或者至少10分鐘超聲裂解，獲得生長因子提取液；以及生長因子提取液經過濾后，進行冷凍干燥保存。

在上述的破壁生長因子的制備方法中，所述離心第1次進行5-10分鐘，第2次進行5-10分鐘，第3次進行10-20分鐘，

在上述的破壁生長因子的制備方法中，所述冷凍/重溶條件如下：-50℃至-60℃冷凍20-30分鐘，35℃至40℃重溶5-15分鐘，并且所述冷凍/重溶優選進行2至5次。

在上述的破壁生長因子的制備方法中，所述超聲條件如下：185W，40kHz超聲10-20分鐘。

在另一具體實施方案中，本申請所提供的制備方法中，所述血液源自以下動物：哺乳類、鳥類、爬行類、兩棲類及魚類。在具體實施方案中，所述血液源自魚類。