[發(fā)明專利]用于檢測腫瘤標志物miRNA-141的SERS生物傳感器的制備方法及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810029732.1
• 申請日: 2018-01-12
• 公開（公告）號: CN108414758B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設計）人: 盧靜;郭智勇;賈亞茹;邵慧麗;胡宇芳;王邃
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/574
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 何仲

本發(fā)明公開了用于檢測腫瘤標志物miRNA?141的SERS生物傳感器的制備方法及其應用，特點是包括以下步驟：（1）將Fe₃O₄@Au磁性納米顆粒與捕獲探針結合得到捕獲單元溶液；（2）將空心金納米球與引發(fā)探針結合制備即得信號單元溶液；（3）將捕獲單元、miRNA?141和信號單元反應結合，磁選分離得到SERS生物傳感器，其應用為利用拉曼光譜儀測定SERS信號，測定一系列不同濃度的miRNA?141對應的SERS信號強度，建立miRNA?141濃度與SERS信號強度之間的定量關系；根據(jù)該定量關系即可測定未知樣品中miRNA?141濃度，優(yōu)點是靈敏度高、特異性強、組裝過程簡單以及檢測速度快。

技術領域

本發(fā)明涉及檢測腫瘤標志物miRNA-141的檢測方法，尤其是涉及用于檢測腫瘤標志物miRNA-141的SERS生物傳感器的制備方法及其應用。

背景技術

癌癥，也稱惡性腫瘤，本質上是一種多基因疾病，是由細胞生長增殖機制失常引起的疾病，嚴重危害人類健康。聯(lián)合國世界衛(wèi)生組織下屬的國際癌癥研究機構預計到2030年將會有1320萬人死于癌癥，確診病例將達到2140萬人。雖然癌癥死亡率高但并非不可治愈，研究表明：癌癥早期是治愈癌癥的最佳時期，因此實現(xiàn)對腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療，可以有效地預防和治療癌癥。腫瘤標志物的發(fā)現(xiàn)使得早期診斷成為可能。腫瘤標志物是在腫瘤的發(fā)生和增殖過程中產(chǎn)生、反映腫瘤存在和生長的物質，大量研究表明，不同種類的腫瘤疾病會導致不同種類微小核糖核酸MicroRNA（miRNA）含量的變化。因此，作為一類具有高特異性的腫瘤標志物，miRNA檢測對腫瘤疾病的早期診療具有重要科學意義和應用前景。

表面增強拉曼散射光譜（SERS）是一種重要的光譜檢測技術，在生物檢測方面體現(xiàn)出了相當大的優(yōu)勢。一方面，粗糙的金屬表面作為SERS基底，能夠使SERS信號強度大大增加，增強幅度能夠達到10⁶～10¹⁴，因此SERS可對微量或者痕量目標物進行超靈敏檢測；另一方面，與其他方法的標記物相比，SERS標記物具有更簡單、更廣泛、更尖銳的“指紋”信號和良好的重復性。目前，大量新型納米材料如空心納米球、納米顆粒、納米線等，也被用作為SERS基底以增強信號強度，其中，空心金納米球、銀納米顆粒因制備方法簡單、具有良好的生物相容性、信號增強能力大等優(yōu)點，尤為受到關注。

生物傳感器是以酶、蛋白質、核酸、細胞等生物物質作為敏感元件與待測樣品進行接觸，并將目標物濃度、物質的量等性質轉變?yōu)殡娦盘枴⒐庑盘柕瓤梢曅盘柕南到y(tǒng)，DNA生物傳感器是其中一種，其以DNA為敏感元件，待測定的核酸序列與敏感元件雜交形成雙鏈DNA結構將反應過程的變化轉化為能記錄的信號，進而推測出待測定的核酸序列的量，近年來，聚合酶鏈式反應（PCR）、雜交鏈式反應（HCR）等技術在DNA生物傳感器構建方面有不少應用。目前，國內(nèi)外還沒有公開關于用于檢測腫瘤標志物miRNA-141的SERS生物傳感器的制備方法的相關研究報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種靈敏度高、特異性強、組裝過程簡單以及檢測速度快的用于檢測腫瘤標志物miRNA-141的SERS生物傳感器的制備方法及其應用。

本發(fā)明解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種用于檢測腫瘤標志物miRNA-141的SERS生物傳感器的制備方法，包括以下步驟：

（1）捕獲單元制備