[發(fā)明專利]外周血外泌體中Smad3蛋白作為分子標記的應用、肝癌檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810023545.2
• 申請日: 2018-01-10
• 公開（公告）號: CN108318688B
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發(fā)明（設計）人: 梁廷波;白雪莉;章琦;傅琦涵
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 沈自軍

本發(fā)明公開了一種外周血外泌體中Smad3蛋白作為分子標記在制備肝癌檢測試劑盒中的應用、肝癌檢測試劑盒。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)人外周血提取的外泌體中Smad3蛋白含量在肝癌患者中顯著升高，作為腫瘤標記物診斷肝癌ROC曲線下面積可達0.888，聯(lián)合甲胎蛋白診斷肝癌，ROC曲線下面積可達0.975，所以，外周血外泌體中Smad3單獨或聯(lián)合外周血中甲胎蛋白可作為診斷肝癌的腫瘤標記物，也可用于判斷肝癌患者術(shù)后復發(fā)風險。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)檢測技術(shù)領域，特別是涉及外周血外泌體中Smad3蛋白作為分子標記的應用、肝癌檢測試劑盒。

背景技術(shù)

我國肝細胞肝癌發(fā)病人數(shù)占全球的一半以上。肝癌惡性程度高，預后差，5年生存率僅16.8％。

肝癌預后差的主要原因之一是肝癌起病隱匿，多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已是晚期，而晚期缺乏有效的藥物治療。因此，開發(fā)新的腫瘤標記物幫助早期診斷肝癌對于改善肝癌患者預后至關重要。甲胎蛋白(Alpha-fetal protein，AFP)是臨床上廣泛使用的肝癌腫瘤標記物。盡管AFP診斷肝癌的敏感性和特異性均較高，但仍存在以下問題，一方面，活動性肝炎、肝硬化、睪丸癌等疾病的患者亦可表現(xiàn)為AFP升高，另一方面，大量的肝癌患者不表現(xiàn)為AFP升高。因此開發(fā)新的腫瘤標記物，聯(lián)合AFP診斷肝癌具有良好應用前景。

另外，當前肝癌以手術(shù)等局部治療方法為主，術(shù)后復發(fā)是其后續(xù)治療困難、造成死亡的重要原因。目前評估肝癌患者術(shù)后復發(fā)風險的方法尚不完善，術(shù)后輔助治療手段欠缺。因此開發(fā)有效的復發(fā)風險評估指標，識別復發(fā)風險高的患者，是進一步針對高危患者開發(fā)相應的輔助治療策略的基礎，具有重要意義和臨床應用前景。

外泌體是各種活細胞分泌的大小約100nm的囊泡，含有豐富的蛋白質(zhì)、核酸和脂類成分，可廣泛存在于人體的體液中，如血液、唾液、母乳、尿液等。由于外泌體內(nèi)部的物質(zhì)較游離的物質(zhì)更為穩(wěn)定，且獲取外泌體具有無創(chuàng)、簡易、檢測方便等特征，因此越來越多的研究關注外泌體內(nèi)容物作為腫瘤診斷的指標及預后判斷指標。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)人外周血提取的外泌體中Smad3蛋白含量在肝癌患者中顯著升高，作為腫瘤標記物診斷肝癌ROC曲線下面積可達0.888，聯(lián)合甲胎蛋白診斷肝癌，ROC曲線下面積可達0.975，所以，外周血外泌體中Smad3單獨或聯(lián)合外周血中甲胎蛋白可作為診斷肝癌的腫瘤標記物。

本發(fā)明提供了外周血外泌體中Smad3蛋白作為分子標記在制備肝癌檢測試劑盒中的應用。

本發(fā)明又提供了一種肝癌檢測試劑盒，包括提取外周血外泌體的試劑以及檢測Smad3蛋白的抗體。

所述的肝癌檢測試劑盒，使用方法為：

(1)取待檢測對象的外周血樣品并提取其中的外泌體；

(2)提取外泌體中蛋白并利用檢測Smad3蛋白的抗體對Smad3蛋白定量；

(3)根據(jù)定量結(jié)果與正常樣本中Smad3蛋白的量進行比較，得出待檢測對象肝癌進展程度。

本發(fā)明又提供了外周血外泌體中Smad3蛋白和外周血中AFP蛋白作為雙重分子標記在制備肝癌檢測試劑盒中的應用。

本發(fā)明又提供了一種肝癌檢測試劑盒，包括提取外周血外泌體的試劑、檢測Smad3蛋白的抗體以及檢測AFP蛋白的抗體。

所述的肝癌檢測試劑盒，使用方法為：

(1)取待檢測對象的外周血樣品并提取其中的外泌體；

(2)提取外泌體中蛋白并利用檢測Smad3蛋白的抗體對Smad3蛋白定量；

(3)利用檢測AFP蛋白的抗體對外周血樣品中AFP蛋白定量；