[發明專利]EGFR和HER2基因突變檢測試劑盒、檢測方法及其應用

有效

• 申請號: 201810022453.2
• 申請日: 2018-01-10
• 公開（公告）號: CN108220442B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 李國平;程龍;袁得天;張鑫
• 申請（專利權）人: 昆山德諾瑞爾生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6869
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林;王玉

本發明公開了一種EGFR和HER2基因突變檢測試劑盒，其包括：EGFR突變檢測試劑，其包括EGFR基因外顯子18、19、20、21特異性引物及dNTP溶液，所述特異性引物為SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2；HER2突變檢測試劑，其包括HER2基因外顯子20特異性引物及dNTP溶液，所述特異性引物為SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4。本發明還公開了一種利用EGFR和HER2基因突變檢測試劑盒檢測EGFR和HER2基因突變的方法，EGFR和HER2基因突變檢測試劑盒的應用，該試劑盒用于檢測與肺癌及其他癌癥相關的EGFR和HER2基因突變。本發明快速準確、操作簡便。

技術領域

本發明涉及一種EGFR和HER2基因突變檢測試劑盒、檢測方法及其應用，屬于基因突變檢測技術領域。

背景技術

肺癌是發病率和死亡率增長最快，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。近50年來許多國家都報道肺癌的發病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發病率占第二位，死亡率占第二位。根據各型肺癌的分化程度和形態特征，目前將肺癌分為兩大類，即小細胞肺癌和非小細胞肺癌，后者包括鱗癌、腺癌和大細胞癌。其中非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌的85%以上，而且大部分就診時已屬晚期。

近年來在NSCLC的治療上，化療的地位雖然沒有發生根本動搖，但其療效已達到一個平臺，毒性及不良反應也限制了臨床應用。靶向治療因其可靠的療效且毒性和不良反應輕，已成為最受關注和最有前途的治療手段之一。目前國內外已經上市的靶向治療藥物針對的主要靶點包括EGFR、HER2、K-Ras、B-Raf、PIK3CA、ALK融合基因和ROS-1融合基因、c-Met、VEGF等。

EGFR、HER2都是ErbB家族受體酪氨酸激酶，表達于正常上皮細胞表面，而在一些腫瘤細胞中常過表達，EGFR、HER2的過表達和腫瘤細胞的轉移、侵潤、預后差相關。其下游的信號轉導通路主要有兩條：一條是Ras/Raf/MEK/ERK-MAPK通路，而另一條是 PI3K/Akt/mTOR通路。當信號傳導至細胞核后，引起核內基因轉錄水平的增加，從而導致細胞增殖、轉化。

大量研究結果表明，EGFR基因突變狀態是EGFR酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKI）治療晚期NSCLC最重要的療效預測因子。突變通常發生于外顯子18~21，其中19外顯子缺失及21外顯子L858R點突變是最常見的對EGFR-TKI治療敏感的突變（EGFR敏感突變）。在非選擇性中國NSCLC患者中，EGFR總突變率約為30%，腺癌患者突變率約為50%，不吸煙腺癌可高達60%~70%，而鱗癌患者仍有約10%的EGFR敏感突變率。

在13%~20%的NSCLC患者中，存在HER2的過表達，HER2基因的突變，主要包括外顯子20的772、776、778位發生突變，存在于大約1%~4%的NSCLC患者中，研究顯示，HER2的突變可能比其過表達與NSCLC的發病機制更加相關，HER2的過表達和EGFR外顯子20的T790M位點突變被認為是抵抗EGFR酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitor，TKI）治療的潛在機制。

目前對于EGFR和HER2基因突變狀態的檢測主要有實時定量PCR法、Sanger測序法和二代測序。實時定量PCR法操作復雜，針對每種突變必須有相匹配的引物，因此鑒定上述突變需要10對以上的引物才可以完成；而且只能檢測已知的突變，如果有未知突變，實時定量PCR法難以給出結果；同時實時定量PCR法的檢測儀器和實驗試劑價格比較昂貴，總的費用較高。二代測序雖然可以一次讀取EGFR和HER2的所有突變，但是二代測序的價格為數千元到萬元，數據處理復雜，周期較長，一般患者難以接受，滿足臨床用藥和檢測診斷方面的時效性要求。相比之下，Sanger測序法最為經濟，操作簡單，技術成熟；但是，以往的測序引物和方法并未涵蓋最新的突變位點和擴增區域，限制了該方法的應用。

發明內容